灌胶常见问题. |
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4. 为什么会有“微笑”和“倒微笑”这样的效果呢? (1)"微笑"是因为你灌胶的时候冷却不均匀,中间部分冷却 不好,导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致。这种情况在较 厚的凝胶以及垂直电泳时常常发生。 “倒微笑“也称“皱 眉“现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的, 特别是当凝胶和玻璃板组成的三明治底部有气泡或靠近隔片的 凝胶聚合不完全便会 产生这种现象。 (2)书上说出现“微笑”是因为整个胶冷凝的不均匀,中间 部分和两端受热不一样而致成了“倒微笑”可能是因为两端的 胶凝的不好,加APS和TEMED后应该混合均匀。 (3)样品中盐浓度过高?点样量太多或每孔点样量不均匀? 电泳电压不稳定或过高? 5. Western-blot 制胶时好多泡泡怎么办? (1)首先,玻璃板一定要洗干净,用洗洁净洗,冲干净后再 用双蒸水冲一,晾干。配胶的时候沿管壁缓缓加入各个成分, 混匀的时候用手轻轻摇匀,如果用枪吹打时要缓慢且不要打到 头。 (2)配胶时混匀要轻,尽量不产生气泡,上胶时要快,枪也 不打到底。加完分离胶后用双蒸水封,待其凝固。即使在上胶 时液面上有气泡,加水后也会浮上来。分离胶凝好后,倒掉里 面的水,用吸水纸吸干,再加浓缩胶,迅速插梳子。 (3)倒胶的时候,用1 ml 的枪沿一侧缓缓加入,不要打到 头,以免带入气泡! (4)将胶在小烧杯里配好后,将电泳槽略微倾斜,将烧杯的 嘴靠在玻璃边缘,直接倒进去,速度快 ,而且不容易产生气 泡,不妨试试。 (5)用双蒸水封时建议用200 ul 的枪加水,这样压力小,以 免把胶冲起来! (6)国产的只能是缓慢加样,别把气泡加进去。如果加进去 了,小心把整个板在桌上敲敲可以让气泡浮上来。 (7)分离胶中的气泡与插梳子有关,垂直插容易产生气泡, |
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