本生ELISA实验指南新手必读

　　ELISA实验方案设计

　　一个周密而完善的实验方案设计，需要合理地安排各种实验因素，严格控制实验误差，从而避免盲目开展实验造成的人力、物力、财力的浪费。

　　通常，我们建议将96微孔板的前两列设置为标准品点样孔，同时设置8个梯度浓度，2列复孔，将标准品工作液由低浓度到高浓度、依次从下至上加入酶标板中。本生微孔板条的后10列可设置为待测样品点样孔，一般设置2个复孔。根据实验需求，可设置正常组、模型组、治疗组等。

　　ELISA初始数据判读

　　►精密度：体现测量数据的再现性。精密度一般用变异系数CV(CV=标准差/平均值×100%)表示。一般情况下，标准品和样本OD值的CV均应≤10%。

　　►OD值：空白孔OD值≤0.1(夹心法);标准品最大OD值≥1.2。样本OD值应落在标准曲线范围内。

　　►线性范围：标准曲线的线性回归相关系数R2≥0.99。

　　ELISA实验结果计算

　　作为ELISA实验的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。

　　我们以夹心法为例，来介绍ELISA实验结果计算。

　　● ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%;

　　● 样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值;

　　● 建立标准曲线：在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度，Y轴为对应的OD值)。推荐使用origin软件。

　　Origin软件可自行百度下载，或点击此链接下载安装包

　　ELISA详细步骤如下：

　　第一步：输入标准品浓度和OD值

　　第二步：选择拟合曲线类型——非线性曲线拟合

　　选中输入的数值框，按如下操作依次点击选项。

　　第三步：选择Statistics和Logistic，勾选“Find X from Y”

　　完成上述操作后，点击Fit按键，拟合曲线和相关信息将自动生成(如第四步所示)。

　　第四步：查看标准曲线信息(如参数值，R-Square等)

　　第五步：修改横纵坐标标题，设置坐标轴类型为对数

　　双击第四步中的拟合曲线图，对其进行编辑。双击修改横纵坐标的标题，双击X轴、Y轴，设置坐标类型为“Log10”，并设置横纵坐标范围。

　　第六步：根据标准曲线计算样品浓度

　　选择第四个工作表(Fit NL Find X from Y1)，在左列输入样本的OD值，对应的浓度将在右列自动生成。

　　ELISA夹心法和竞争法的标准曲线图

　　注意：

　　如果样本的OD值超出标准曲线的上限，请在实验前适当稀释样本，以获得精确结果。分析数据时，样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数。

　　本生ELISA实验指南新手必读 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。