之前通过腹腔注射Evans Blue ，然后测量在620 nm 的吸光度来判断血脑屏障通透性的实验由于出现未成功注射Evans Blue 小鼠的测得值与成功注入Evans Blue 的测得值相差无几的情况，实验的可靠性受到了质疑。查阅文献发现还有其他验证方式，于是学习探索了新的操作。

眼眶后注射（retro-orbital injection）：完成注射后，液体即可迅速进入通过静脉循环进入心脏，随后迅速泵往全身，实现了注射效果的实时验证。

操作步骤详解：

1.吸入麻醉并在接受注射的眼睛上滴利多卡因；（先全麻找注射位点和手感，然后只做局部麻醉）；

2.根据体重吸取待注射的液体，6ul/g，注意排空气泡，避免因空气栓塞导致小鼠死亡；

3.左手大拇指和食指将小鼠固定好(避免压迫气管），微微用力并使眼球突出于眼眶；

4.注射针尖（尖口朝向内侧，以保护眼球不被划伤）与小鼠鼻尖方向呈45°角缓慢刺入内眦，微微用力即会有明显落空感，刺入深度为3-5mm；

5.缓慢推注，缓慢退针，轻轻按压眼睛以控制出血。

注意事项：

1.注射总量：8周左右小鼠不超过0.15ml，幼鼠则不超过0.08ml。

2.避免戳到眼眶后部的骨头；插入后不要移动针头以避免血管破裂；不要抽吸避免血管塌陷。

3.注射失败的几种情况：小鼠皮下起包；注射液从眼眶中溢出；注射后小鼠口腔内有注射液流出。

4.注射成功的情况：快速退针的情况下眼眶内会有血液流出；快速注射时小鼠身体会有抽动；未见上述失败的情况。

参考链接：

1.https://www.jove.com/v/10214/compound-administration-iv

2.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7339923/

3.https://www.doc88.com/p-3876160855385.html