3、测吸光度值要有一定的时间范围，在测定是你会发现，随着时间的推移没空都会变深些，（这可能是由于ＭＴＴ在空气中氧化的结果，我记不清了，你再找找书，另外，具体时间我也没有记清）

4、养性药物的选择，要选择经典的，有说服力的，又对你的细胞有很好的杀伤了力的药物。别认为简单，我就曾经因为阳性药物选择错误而重新做试验，惨痛的教训呀！！

丁香园网友Gujun的观点为：

我读书时应用MTT作肿瘤细胞株药敏，采用以下文献“周建军，乐秀芳，韩家娴，等。评价抗癌物质活性的改良MTT方法。中国医药工业杂志 1993；24（10）：455-6”。该方法为上海中科院细胞所所采用，MTT产物应用三联液溶解彻底，不需振荡，对于悬浮细胞尤其适合，且产物稳定。对于贴壁细胞，他们那时采用SRB方法。

简要方法（我的肿瘤药敏实验）：

1、将一定密度的肿瘤细胞90μl/孔接种于96孔微量培养板内,然后加入药液10μl/孔,每种药5个浓度(每个浓度相差10倍),一个浓度设4个复孔。每块板设一个空白调零孔,内加培养液，不含细胞与药物。每种细胞设6个正常对照孔,加样100μl/孔，不含药物。接种完毕后在37℃， 5%CO2条件下孵育培养48小时。

2、加MTT：加MTT溶液(5mg/ml)20μl/孔,混匀后37℃，5%CO2 条件下孵育4小时。

3、加三联液：（三联溶解液：SDS 10g， 异丁醇 5ml ， 10M HCl 0.1ml 用双蒸水溶解配成100ml溶液），加溶解三联液100μl/孔，混匀后37℃放置过夜以溶解甲臢。

4、吸光度（A）测定：用酶标仪测定每孔吸光度，测定波长为570nm，校正波长为630nm。

5、计算：肿瘤抑制率=（对照组A值－治疗组A值）／对照组A值×100%， IC50值用Logit法计算。

丁香园网友Wizard回答淋巴细胞增殖

1、应避免稀释MTT，可去培养液，但为简便起见，可以用直接翻板法。翻板后，每孔大约残留液体20ul左右。，MTT最终浓度0.5-1mg/ml。

2、对于DMSO等有机溶剂溶解的时间不能过长，如10min就可以获得结果。

3、96孔细胞培养板接种细胞数应在（0.5-2）×10E4范围，细胞过多，会使MTT等完全降解或细胞拥挤不能单层生长，使光吸收度降低，影响结果。

MTT染色后，96孔板中的上清弃去后是否要用PBS洗一下再加DMSO？另外是用排枪吸去上清液呢，还是甩干即可？遇到不贴壁的细胞如何让细胞不流失？

丁香园网友eeflying的观点为：

MTT法是一种通过测定细胞能量代谢水平用以间接反映细胞增殖情况的检测方法。MTT全名四甲基偶氮唑盐，为淡黄色可溶性化合物，或细胞特别是增殖期细胞可通过线粒体能量代谢中的琥铂酸脱氢酶的作用使淡黄色的MTT分解，形成蓝色结晶状fomazan，沉积于细胞内或细胞周围，形成量与细胞增殖状况成正比，直接地说，是与线粒体的呼吸状态成正比。

从上述机理可以得出：

1、不必洗，MTT与fomazan的颜色不同，吸光谱也不同，实际上我们测得是OD570的吸收光，你可以自己测一下，实际MTT的吸光度在此波长很小。其实fomazan对细胞是有害的，部分细胞就死掉了，formazan的结晶在其周围，要洗不就丢了？我们加DMSO,SDS,酸化异丙醇其实只是溶解剂。

2、到是必要注意酚红的影响，酚红是影响D值的测定，要设白对照组。