该方法有现成试剂盒，使用者只需要按照试剂盒的操作步骤完成即可，其特异性、重复性及精密性较好，可实现pg级别的绝对定量。本质原理上ELISA和WB都可以，但炎症因子作为蛋白质，存在浓度级的问题，太低了检测不到，或者不能真实反映，所以细胞分泌的炎症因子一般不能用来跑WB。

3）ELISpot

Enzyme Linked Immunospot Assay（ELISpot），酶联免疫斑点技术，细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISpot酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。该技术可以在单细胞水平对抗体分泌细胞及细胞因子分泌细胞进行检测，能从20万-30万细胞中检岀1个分泌该蛋白的细胞。该方法关注的结果是分泌细胞的比率（等于阳性细胞数/总细胞数）。主要用于疫苗、细胞治疗、基因治疗等领域，是研究T细胞免疫原性反应的主要检测方法。

ELISpot法源自ELISA，又突破传统ELISA法，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。ELISpot通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。而ELISA则通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。该方法的样本要求是活细胞，其中细胞存活率最好不低于80%，如果能达到90%以上更好。

4）Meso Scale Discovery（MSD）

Meso Scale Discovery（MSD）超敏电化学发光技术，基于石墨微孔板的电化学发光免疫分析是根据ELISA基本原理的升级，在板底通电从而激发标记物SULFO-TAG发光并由CCD Camera进行信号采集。主要基于超敏多因子电化学发光分析仪MESO Sector 600或Quickplex SQ 120。通过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测。也可在24孔板里定制实现100指标/孔的筛选检测。

MSD系统的灵敏度略高于流式细胞仪（CBA）系统，可以定量自然细胞因子（IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IL-12p70、IL-1β）的循环水平，并准确回收添加到血清样本中的已知数量的重组细胞因子。是一种电化学发光法，用于检测细胞因子、蛋白质、抗体和核酸等生物分子，属于第三代免疫分析技术。

5）Luminex液相芯片检测技术

该技术是结合微球和流式细胞仪的原理来检测蛋白的一种方法，核心是将聚丙乙烯微球或者磁性微球用荧光染料的方法进行编码，通过调节两种荧光染料的不同配比获得最多100种具有不同荧光光谱的微球，每种微球共价交联上针对特定抗原的捕获抗体。应用时，先将针对不同检测物的微球混合，加入待测样本后，靶分子与微球表面的捕获抗体特异结合，每个反应孔中可同时完成最多100种检测反应。上机时仪器通过两束激光分别识别微球的编码和微球上报告分子的荧光信号强度，荧光强度反应微球结合的靶标蛋白的含量，这一步用于定量。因此，利用微球技术，可以同时检测多个蛋白。

Luminex技术类似多重ELISA检测，也可以实现pg级别的绝对定量，可以检测细胞因子、趋化因子、转录因子和生长因子等260多种蛋白和数以千计基因表达情况，而且一次可以检测多种蛋白指标。

6）Olink平台

该平台是基于临近延伸分析（PEA）技术，通过一对特异性抗体结合识别靶蛋白，这对抗体分别偶联DNA寡核苷酸标记，当结合在同一蛋白上的两个抗体相互靠近时DNA寡核苷酸互补配对并结合DNA聚合酶进行扩增。最后，使用qPCR或二代测序技术定量DNA寡核苷酸，通过特异性的核苷酸序列信号来反应检测蛋白质的含量。

Olink技术检测限可达飞摩尔（fg/mL）数量级，具有高通量、高灵敏、低体积、宽动态、支持液体活检及多样本形式、自动化样本处理流程提供绝佳的简易性、准确性及重复性。可用于疾病预测、病例分层、诊断及预后、筛选疾病标志物、药物靶点等基础研究。返回搜狐，查看更多