表观遗传相关的研究近年来也是一大研究热点，我们知道的表观遗传修饰有组蛋白修饰，DNA甲基化，RNA甲基化等等。之前的推文也有专门介绍RNA甲基化相关的研究现状和优势RNA m6A甲基化综述，以及相关的产品推荐：详情。我们力荐的m6A检测试剂盒p-9005也因其独特的优势和性能被广大研究者偏爱，也是如今热卖的产品，而今天小编就给大家复盘一下关于p-9005 检测m6A甲基化相关的疑难杂症和治疗方法。

一、 RNA甲基相关概念

RNA甲基化是RNA的可逆翻译后修饰，其表观遗传地影响许多生物过程。它发生在不同的RNA中，包括tRNA，rRNA，mRNA，tmRNA，snRNA，snoRNA，miRNA和病毒RNA。不同的RNA-甲基转移酶具备相应的催化策略，用于RNA甲基化。

6-甲基腺嘌呤（m6A）是在存在于真核生物的RNA分子中最常见的和丰富的甲基化修饰和占所有RNA甲基化的80％以上。它可以被称为“第五RNA碱基”并且在调节胚胎发育和细胞命运中具有广泛的作用。

而我们推荐的p-9005产品是Epigentek公司的力荐产品，Epigentek集团公司是全球领先的创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商，专门做表观遗传方面产品，可以说在表观遗传方面，他们是专家。

二、 p-9005产品性能和优势

性能：EpiQuik™m6A RNA甲基化定量试剂盒（比色）是一整套优化的缓冲液和试剂，用于比色定量RNA中的N6-甲基腺苷（m6A或6mA）。它适用于使用从任何物种（例如哺乳动物，植物，真菌，细菌和病毒）中分离的总RNA直接检测m6A RNA甲基化状态。

EpiQuik™m6A RNA甲基化定量试剂盒优势：

      1. 检测物种多样化，无物种限制；

      2.操作简便快速，3~4h即可完成整个实验

      3.高灵敏度，其检测极限可低至10 pg m6A

      4.独特的结合溶液—可从mRNA和ncRNA（例如tRNA，rRNA和snRNA）中定量m6A

      5.高特异性

      6.带孔微孔板格式使该测定灵活用于手动或高通量分析。

      7.简单，可靠且一致的测定条件

三、p-9005检测的疑难杂症和药方

1.病症一：样本

      对于这个试剂盒，很多人对与样本方面有很多的疑问，虽然试剂说明书上说可适用任何物种的m6A检测，但是同学们还是有各种各样的问题：

（1）RNA样本类型

      处方：培养的细胞，新鲜和冷冻的组织，石蜡包埋的组织，血液，体验等等样本的总RNA，mRNA，tRNA，rRNA和snRNA均可适用该试剂盒。

（2）RNA样本提取方式

      处方：市面上销售的试剂盒提取的均可，Trizol法可能是可以的，但是Trizol法提取的请确保提取后将RNA重新溶解在不含RNase的水中或合适的缓冲液（例如TE）中，并且RNA质量高且相对不含DNA。

（3）RNA样本符合要求的标准

      处方：OD 260/280 >1.9。260/230 > 1.7 【无DNA污染】

2.病症二: 对照

      关于试剂盒中的对照方面，也是有很多同学问询。

（1）阳性对照怎么设置

      对于第一次上手做这个实验的同学们或许都会有些疑惑，阳性对照难道不都是要做标准曲线的吗？不然怎么对照和计算呢？

      处方：其实，这个试剂盒是可以根据实验需要进行选择做单点对照（0.5ng/ml）还是做标准曲线（0.02~1ng/ml）。建议做复孔哟。

（2）阳性对照信号太弱

      处方：【1】添加至孔中的PC量不足，确保加入足够量的PC；【2】标准液未进行最佳稀释，并充分混合；【3】确保PC的保存方式是按照说明书进行保存的，一定要保存在指定条件下哟，【4】在使用的时候，要注意稀释后放置在冰上，保证有效成分不被讲解。

（3）阴性对照背景值太高

处方：【1】可能没有洗干净，按照说明书进行清洗；【2】被PC或者样本污染了，切记要换枪头加样；【3】孵育时间太长，按照说明书进行操作1~10min，最长也不能超过2h；【4】显色时间过长，可适当缩减显色时间。

（4）样本值太低或者没信号

处方：

     【1】可能是因为没有加入足够量的RNA。厂家推荐的样本输入量为100ng~300ng，200ng为最佳，但是这又不是绝对的噢，同学们可根据自己的样本做相应的调整尤其在信号偏弱的情况下，可适当上调RNA的输入量。

     【2】可能是因为产品本身m6A的含量就很低。

     【3】可能是样本的纯度不够，有DNA或者其他的污染，或者RNA发生了降解，这些都可能造成低信号。

     【4】mRNA样本的话，可能因为片段太小（