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2023-09-26 15:49| 来源: 网络整理| 查看: 265

9:00-9:40

昨天在小郭老师讲述了关于logfc和p值的含义,差不多有点理解的框架。差异倍数(fold change),fold change翻译过来就是倍数变化。limma接受的输入参数就是一个表达矩阵,而且是log后的表达矩阵(以2为底)。

那么最后计算得到的logFC这一列的值,其实就是输入的表达矩阵中case一组的平均表达量减去control一组的平均表达量的值,那么就会有正负之分,代表了case相当于control组来说,该基因是上调还是下调。

假设A基因表达值为1,B表达值为3,那么B的表达就是A的3倍。一般我们都用count、TPM或FPKM来衡量基因表达水平,所以基因表达值肯定是非负数,那么fold change的取值就是(0, +∞)。为什么我们经常看到差异基因里负数代表下调、正数代表上调?因为我们用了log2 fold change。当expr(A) < expr(B)时,B对A的fold change就大于1,log2 fold change就大于0(见下图),B相对A就是上调;当expr(A) > expr(B)时,B对A的fold change就小于1,log2 fold change就小于0。通常为了防止取log2时产生NA,我们会给表达值加1(或者一个极小的数),也就是log2(B+1) - log2(A+1)。

为什么不直接用表达之差,差直接有正负啊?假设A表达为1,B表达为8,C表达为64;直接用差B相对A就上调了7,C就相对B上调了56;用log2 fold change,B相对A就上调了3,C相对B也只上调了3. 通过测序观察我们发现,不同基因在细胞里的表达差异非常巨大,所以直接用差显然不合适,用log2 fold change更能表示相对的变化趋势。

p值是在统计学的范畴假设检验首先必须要有假设,我们假设A和B的表达没有差异(H0,零假设),然后基于此假设,通过t test(以RT-PCR为例)算出我们观测到的A和B出现的概率,就得到了P-value,如果P-value



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