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三糖铁琼脂(Triple Sugar Iron agar, TSIA)试验旨在区分肠杆菌科的不同类群或属，它们都是能发酵葡萄糖并产生酸的革兰氏阴性杆菌，并与其他革兰氏阴性肠道杆菌区分开来。分化是基于发酵葡萄糖和乳糖或蔗糖和硫化氢(H2S)生产。TSIA培养基含有10份乳糖:10份蔗糖:1份葡萄糖和蛋白胨。苯酚红和硫酸亚铁分别作为酸化和H2S形成的指示物。用于检测碳水化合物发酵的酸碱指示剂酚红是由碳水化合物培养基在酸存在时颜色从橘红色到黄色的变化来表示的。蛋白胨氧化脱羧，形成碱性产物，pH升高。这可以从介质的颜色从橙红色到深红色的变化中看出。存在于培养基中的硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵检测硫化氢的产生，并通过管的对接部的黑色显示出来。

首先通过发酵生物首先使用葡萄糖，并且整个培养基在8至12小时内变为酸性（黄色）。即使在18至24小时孵育期后，均为酸性的恒生仍然是由于葡萄糖在管中的厌氧条件下的葡萄糖下发酵而导致有机酸。然而，由于在倾斜的有氧条件下的发酵产物氧化，倾斜恢复到碱性（红色）状态。这种变化是CO 2和H 2 O形成的结果，以及培养基中的辣椒氧化至碱性胺。除了葡萄糖，乳糖和/或蔗糖之外，在倾斜上形成的大量发酵产物中和碱性胺并使倾斜酸性（黄色）呈现，条件是在18至24小时内读取反应。如果倾斜和臀部成为碱性，葡萄糖尚未发酵。显示该反应的生物被定义为非发酵罐，并从中存在于培养基中的胨。通过琼脂中的气泡或裂纹或通过从管的侧面或底部分离来表示CO 2和氢气（H2）的形成。H 2 S的生产（减少到H2S的硫代硫酸钠）需要酸性环境，并且与柠檬酸铁铵的反应产生管中的琼脂屁股的变黑。

三糖铁琼脂

最终pH 7.3 +/- 0.2，25ºC。

解释

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