我们先来了解一下什么是Kaiser Test，其原理是固相上的氨基与茚三酮显色反应，该分析方法相当于检测出末端氨基。茚三酮与氨基反应产生一种Ruhemann’s purple的色素。测试过程中加入苯酚可以调节pH值，KCN的作用是作为还原剂，是为了防止中间体被空气氧化。

Kaiser Test试剂可以直接购买成品，也可以根据个人需要从廉价的试剂中自制。试液1（茚三酮：500 mg，乙醇：10 mL）；试液2（苯酚：80克，乙醇：20 mL）；试液3（1mM KCN水溶液：2 mL，吡啶：100 mL）。操作步骤如下：

将少量固相合成树脂加入微管中，用MeOH清洗3次（去除体系里的DMF）。

向微管中加入试液1~3各滴1滴，100℃下加热1分钟。

 如果微管内的溶液呈深蓝色到紫色，则表示存在未被反应掉的末端氨基。无色~黄色的情况，表示缩合反应已经完成。

本期小编给大家介绍的新方法可以称为NHPI试验法，这是一种新的检测方案，可以可逆地对树脂进行染色。NHPI试验可以检测出含有任何级数氨基的氨基酸，且氨基酸种类不受限制。而且不需要担心用到Kaiser test时的剧毒物氰化钾（KCN），并且用于做试验的树脂可以回收利用，由此不会影响总收率。该方法相比Kaiser test方法而言改善了许多。

试液：N-羟基邻苯二甲酰亚胺（NHPI）的饱和DMF溶液（~2.7 M）；颜色变化不明显的情况下，使用N，N’-二羟基焦美林胺（NDHPI）代替NHPI可以得到改善。操作步骤如下：

将少量固相合成树脂加入微管中，用MeOH清洗3次（去除体系里的碱）。

将试液与树脂混合，重复清洗3次。

如果清洗3次后的树脂呈现红色至褐色则表示存在未反应的末端氨基，如果树脂呈现出无色至黄色，表示缩合反应已经全部进行完毕。

NHPI试验法，NDHPI试验法与Kaiser Test相比具有明显优点，无毒，颜色变化也很明显，可以可逆地对树脂进行染色，NHPI试验可以检测出含有任何级数氨基的氨基酸，且氨基酸种类不受限制。