原标题：小鼠ILC亚群及其功能的检测

ILCs是一个独特的固有效应细胞亚群，主要分布在粘膜表面，占CD45+白细胞的1%-5%，在宿主防御、组织重塑和修复、炎症和代谢稳态中具有不同的作用。尽管缺乏重排的抗原受体，但ILCs在表型和功能方面与传统的T辅助（Th）1型（Th1）、Th2和Th17细胞有明显的同源性，因此被类似地分为ILC1、ILC2和ILC3亚群。此外，真正的ILC亚群现在已经扩大到包括细胞毒性NK和淋巴组织诱导（LTi）细胞，这两类细胞在表型和功能上分别与ILC1和ILC3相似，但表现出不同的发展轨迹。然而，人们越来越认识到ILC亚群不是固定的，这些细胞可以根据局部炎症环境而表现出明显的可塑性。因此，深入进行免疫表型分析以便准确捕捉这种生物学变化，是很有必要的。

淋巴细胞产生于骨髓（BM）内的共同淋巴祖细胞，通过一系列的中间阶段，产生ILC祖细胞（ILCP）。ILCP不仅存在于骨髓中，还存在于外周血中，并在新生儿和成人的外周组织（包括肺、皮肤和次级淋巴组织）作为组织驻留群体存在。在早期发育过程中，转录因子 PLZF的表达决定了固有淋巴祖细胞的分化：PLZF+ILCPs生成ILC1、ILC2和ILC3，但不会向LTi或NK细胞分化 。除了PLZF，ILCPs还显示出 Il18r1的高水平表达，因此需要IL-18信号进行增殖和分化。重要的是，ILCPs和成熟ILC亚群的发育和功能都依赖于典型的IL-7信号，IL-7受体（ IL-7Rα）的表达和IL-7的消耗在ILCs中比它们的T细胞对应亚群大得多。IL-7Rα+PLZF+IL-18Rα+ILCP持续分化为不同的ILC亚群是在一系列定义谱系的主转录因子的控制下进行的，所有终末亚群都缺乏髓系、淋系常见胞膜标记物的表达，所以ILC被定义为谱系阴性（Lin-）细胞。

ILC1s的特点是组成性表达T-bet（由Tbx21编码），这是产生IFN-γ和在IL-12和IL-18刺激下对细胞内病原体反应的核心。ILC1与细胞毒性NK细胞相似之处在于均表达NKp46，但是ILC1表达CD49a和/或TRAIL，不表达CD11b和CD49b。

ILC2s是小鼠肺部最丰富的ILCs亚群，依赖GATA-3的表达来维持和生存。与Th2的同类相似，ILC2s在控制螺旋体感染方面发挥着关键作用，同时通过产生IL-5和IL-13来响应IL-33、IL-25和胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP），使过敏原诱导的过敏性炎症持续存在。此外，ILC2s的炎症依赖性可塑性已在小鼠肺部和人类外周血中得到证实，即在IL-1β、IL-12和IL-18的刺激下，ILC2s会转化为类似ILC1的转录和功能特征，表达T-bet（Tbx21）和产生IFN-γ 。同样，人类ILC2s在IL-1β和IL-23的刺激下，转分化为表现出ILC3样特征的亚群，表达ILC3标志性转录因子RORγt的上调和产生IL-17。

ILC3s是一个异质性的亚群，通过IL-1β和IL-23介导的激活产生IL-17A和IL-22，在对抗细胞外微生物（包括真菌和细菌）方面发挥了广泛的作用。ILC3s是稳态ILC亚群的代表，其发育和功能严格依赖于RORγt（由Rorc编码）的表达。然而，根据NKp46和CCR6的不同表达，小鼠ILC3s可以进一步分为三个亚型；即NKp46+CCR6-（NCR+）、NKp46-CCR6-（NCR-）和NKp46-CCR6+（CCR6+ LTi-like）ILC3s。此外，NCR+ ILC3s与ILC1s均存在T-bet的转录表达，这对两者表达NKp46和产生IFN-γ至关重要。此外，用IL-12刺激小鼠组织特异性的NCR+ ILC3s，促进了RORγt的下调和T-bet的同时上调，进一步促进了与IFN-γ+ ILC1s相关的表型，显示了较强的可塑性。

下面来看小鼠ILC分析的方案和设门逻辑。

方案

设门逻辑

所有样本均用PMA/离子霉素/BFA刺激5小时。

首先排除碎片、排除粘连体，圈选CD45+的活细胞：

接着，圈选Lin-IL-7Rα+的ILC群，并在其中分出PLZF+的ILCP：

在小鼠肺组织中，对ILC中非ILCP部分进行分析（即成熟的ILC），分出ILC和ILC2。其中Tbet+、RORγt-、CD49b-、ST2-、NKp46+、IL18Rα+的ILC1根据CD49a和TRAIL再分出两个亚群；Tbet-、RORγt-、CD49b-、GATA3+的ILC2，根据ST2和KLRG1分出三个亚群；RORγt+的ILC3根据CCR6和NKp46分出三个亚群：

ILC的功能，可通过PMA+离子霉素+BFA+IL12、IL18共同刺激5小时，验证其效应因子表达：

而NK细胞，则在前面的Lin+群体中分出Tbet+NKp46+的群体，并根据 CD49a、CD49b分出trNK和cNK：

淋巴结的分群，与肺组织类似，比例有所不同，详请参见原文PDF（免费 ）：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/cyto.a.24702

信源：Mincham KT, Snelgrove RJ. OMIP-086: Full spectrum flow cytometry for high-dimensional immunophenotyping of mouse innate lymphoid cells [published online ahead of print, 2022 Nov 4]. Cytometry A. 2022;10.1002/cyto.a.24702. doi:10.1002/cyto.a.24702

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