高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，

引用了气相色谱的理论，

在技术上，

流动相改为

高压输送（最高输送压力可达

4.9´107Pa

）

;

色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而

成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）

；同时柱后连有高

灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

一、特点：

1

．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液）

，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了

迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达

150

～

350×

105Pa

。

2. 

高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达

1

～

10ml/min

。高效液相色谱

法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于

1h 

。

3. 

高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

4.

高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如

荧光检测器灵敏度可达

10-11g

。另外，用样量小，一般几个微升。

5.

适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏

度高，

分析速度快，

操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性

差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。

而高效液相色谱法，

只要求试样能制成溶液，

而

不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于

400 

以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的

75% 

～

80% 

）原则上都可应用高

效液相色谱法来进行分离、

分析。

据统计，

在已知化合物中，

能用气相色谱分析的约占

20%

，

而能用液相色谱分析的约占

70

～

80%

。

二、

性质及原理：

高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、

疏水性高效液相色

谱、

反相高效液相色谱、

高效离子交换液相色谱、

高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱

等类型。

用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液

相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在

色谱仪中进行。

高效液相色谱法的主要类型及其分离原理

根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型：

1 

．液

—

液分配色谱法

(Liquid-liquid 

Partition 

Chromatography)

及化学键合相色

谱

(Chemically 

Bonded 

Phase 

Chromatography) 

流动相和固定相都是液体。流动相与固定相

之间应互不相溶

（极性不同，

避免固定液流失）

，

有一个明显的分界面。

当试样进入色谱柱，

溶质在两相间进行分配。

LLPC

与

GPC

有相似之处，即分离的顺序取决于

K

，

K

大的组分保

留值大；但也有不同之处，

GPC

中，流动相对

K

影响不大，

LLPC

流动相对

K

影响较大。

a. 

正相液

—

液分配色谱法

(Normal Phase liquid Chromatography): 

流动相的极性小于固

定液的极性。

b. 

反相液

—

液分配色谱法

(Reverse Phase liquid Chromatography): 

流动相的极性大于固

定液的极性。

c. 

液

—

液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流

动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪

70

年代末发展的化学键合固定相（见后）

，可克服上述缺点。现在应用很广泛（

70~80%

）

。

2 

．液

—

固色谱法

流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）

。这是根据物质吸附作用的不同来进

行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子

(X) 

和溶剂分子

(S)

对吸附剂表

面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是

S

）

，可表示如下：