宿主细胞蛋白（HCP）是与过程相关的杂质，由用于生产生物药物蛋白的宿主细胞表达。在纯化过程中，大部分的HCP被去除（> 99％），但残留的HCP量仍保留在分布的产品中，例如单克隆抗体（mAb）、抗体-药物结合物（ADC）、治疗性蛋白质、疫苗，以及其他基于蛋白质的生物制药。

诸如FDA和EMA之类的国家法规授权要求必须对生物药品进行分析和纯化，以将宿主细胞蛋白HCP降低到可接受的水平。对HCP的接受程度将根据具体情况进行评估，并取决于多个因素，其中包括：剂量、给药频率、药物类型和疾病严重程度。宿主细胞蛋白HCP的分析并不简单，因为HCP混合物由大量蛋白质组成，这些蛋白质对于特定宿主而言是xxx的，与预期的重组蛋白质无关。

由于已建立的分析方法的检测极限，宿主细胞蛋白HCP的接受水平通常在1-100 ppm（1-100 ng / mg产品）范围内。即使最终产品中这些痕量的宿主细胞蛋白HCP到达患者体内，尚不清楚特定的残留蛋白质杂质是否会影响患者的蛋白质稳定性或免疫原性。如果稳定性受到影响，则活性物质的耐久性生物制药中的含量可能下降。蛋白质的作用也可能高于或低于预期。长期无法确定免疫原性的程度，因此可能对患者的健康造成相对严重的威胁。

由于将外源蛋白引入人体免疫系统具有潜在的安全风险，因此在生物药物中表征HCP人群至关重要。对于常用的宿主细胞系统，例如大肠杆菌、酵母、小鼠骨髓瘤细胞系（NS0）和中国仓鼠卵巢（CHO）、宿主系统与的人体有很多。

公认的是，与人蛋白质的较高差异会增加免疫原性的风险，因此，建议使用较高水平的宿主细胞蛋白HCP引发更明显的免疫反应。一些研究将HCP的减少与特定炎性细胞因子的减少联系在一起。其他HCP可能与人类蛋白质非常相似，并可能诱导针对人类蛋白质或原料药蛋白质具有交叉反应性的免疫反应。HCP对个别患者的确切后果尚不确定，并且难以通过生物制药批准中使用的当前分析方法来确定。

在生产过程中，包括宿主细胞基因，产物表达方式和纯化步骤在内的几个因素会影响HCP的组成和丰度。一些研究报告说，宿主细胞蛋白HCP通常通过与重组蛋白相互作用而与产品本身一起被纯化。因此，对分析仪器的要求非常高，必须进一步发展以更全面地分析生物药品中的整个HCP群体。

酶联免疫吸附测定（ELISA）是HCP分析最常用的方法，主要是因为它是检测低水平HCP的xxx具有所需灵敏度的方法。即使开发过程需要大量的工作时间和一些研究动物，分析还是可以快速进行和解释。但是，用于HCP分析的ELISA存在一些局限性。HCP定量主要依靠抗HCP 抗体的数量和亲和力来检测HCP 抗原。抗HCP抗体库无法覆盖整个HCP群体，并且免疫原性弱的蛋白无法检测，因为在此过程中不会生成等效的抗体。显然，仅靠HCP-ELISA不足以分析HCP群体，因此需要提供补充信息的正交方法。

为了对生物制药中HCP的风险进行全面评估，并进行适当的生产质量控制，至关重要的是在生产过程中和最终产品中对所有HCP进行识别和定量。合适的正交方法理想地能够：

满足这些要求并作为ELISA的主要正交方法出现的方法是质谱（MS）。MS与液相色谱（LC-MS）偶联时，MS的主要优势是能够鉴定低丰度的单个蛋白质。

最近，通过SWATH LC-MS方法进一步改进了MS方法。SWATH是质谱的一种独立于数据的获取（DIA）形式，其中质量范围在较小的质量窗口中划分，然后使用串联MS（MS / MS）进行分析。关键优势是通过应用内部蛋白质标准品，可进行单个宿主细胞蛋白HCP鉴定和xxx定量的可重复性。

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