超分辨荧光显微镜研究细胞表面GLUT1的成簇和活化机制 二

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超分辨荧光显微镜研究细胞表面GLUT1的成簇和活化机制 二

2024-03-03 15:09| 来源: 网络整理| 查看: 265

为验证GLUT1蛋白的成簇与脂筏存的关系,我们用双色dSTORM成像分别对HeLa细胞顶膜上的脂筏结构(图A)和GLUT1蛋白(图B)进行成像。从图A可以观察到脂筏在细胞膜上也是形成大小不同的簇状结构。通过将脂筏(图A)和GLUT1蛋白(图B)的超分辨重构图进行叠加,我们发现在二者的叠加图(图C)上,两种簇结构存在一定程度的共定位关系。接下来我们对这种共定位用Mander's系数,M1和M2,进行定量分析。通过计算和统计每个细胞样品上所有区域的共定位系数,我们得到了脂筏和GLUT1蛋白的在HeLa细胞表面每种位置关系的百分比。其中高度重叠和部分重叠这两部分被统一看作GLUT1与脂筏共定位。结果显示,35%的GLUT1蛋白在HeLa细胞膜上是与脂筏结构共定位的,其余部分则可能位于别的成分组成的脂筏结构或者非脂筏结构中。这暗示我们GLUT1团簇结构的形成不仅有脂筏结构的影响,同时可能有别的因素影响GLUT1蛋白的聚集。同时,这种维持细胞膜天然状态的成像也更加直观的让我们看到了GLUT1蛋白与脂筏结构之间的关系。 

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如图    揭示HeLa细胞膜上脂筏与GLUT1之间相对空间分布的双色dSTORM成像。(A和B)在同一细胞膜上用Alexa 647偶联CT-B标记的脂筏结构(A)和用Alexa 532偶联GLUT1抗体标记的GLUT1蛋白(B)的dSTORM重构图。(C)显示脂筏(红)和GLUT1共定位的双色dSTORM 叠加图。(D-G)GLUT1和脂筏四中不同位置关系的代表图,依次为重叠(D),部分重叠(E),边缘相接(F)和分离(G)。(H)四中定位关系所占比例的统计分析柱状图。图A-C标尺:5 μm;D-G标尺:200 nm。



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