内参蛋白,你选对了吗?

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内参蛋白,你选对了吗?

2023-10-30 00:11| 来源: 网络整理| 查看: 265

3. 当细胞发生凋亡的时候,核多聚 (ADP-核糖) 聚合酶 PARP 和核膜的结构组分 Lamins,都不适合做核蛋白的内参。在凋亡细胞体内,PARP 是 caspase-3 裂解的主要靶蛋白之一3。

Lamin A/C 能够被 caspase-6 切割,可以作为 caspase-6 激活的标志。在凋亡过程中,Lamin A/C 能够被特异地剪切成大片段 (41-50 kDa) 和小片段 (28 kDa)。Lamin 的剪切会引起细胞核的失调和细胞死亡4,5。

4. VDAC (电压依赖性阴离子通道) 广泛表达,定位于线粒体外膜,通常认为这是代谢传入或传出线粒体的主要方式。另外,这个通道在凋亡信号中发挥重要作用。

Bcl-2 家族蛋白调控凋亡过程中线粒体通透性的改变,他们能结合 VDAC 改变通道的动力6。VDAC 的同二聚体化可能是一种改变线粒体通透性和促进细胞色素 C 释放的机制。

5. Cofilin 属于一组保守的小 Actin-结合蛋白家族,在胞质分裂,内吞,胚胎发育,压力应激和组织再生过程中发挥了关键作用。在刺激因素作用下,Cofilin 作为提前存在的细丝促进 Actin 肌动蛋白丝的再生7。Cofilin 的第 3 位丝氨酸被 LIMK 或 TESK 磷酸化后会抑制 Cofilin 的这种作用8。

6.Actin ,一种广泛表达的真核蛋白,是细胞骨架的重要组分。研究证明在原始乳腺癌细胞中 Actin 是高度磷酸化的9。研究也发现凋亡条件下,心脏肌肉以及骨骼肌中都能观察到 beta-Actin 的清除10,因此,beta-Actin 不适用于心脏和骨骼肌的样品。心肌和骨骼肌样本可以用 alpha-Actin 做内参。

Caspase-3 对 Actin 的清除会加速泛素/蛋白酶体依赖的肌肉蛋白酶解11。 细胞生长条件的改变以及与胞外基质组分的相互作用都可能会导致 Actin 蛋白合成的变化 。

7.GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶), 在糖酵解过程中将 3-磷酸甘油醛进一步磷酸化。虽然在不同组织中的表达水平有差异,但 GAPDH 普遍被认为是一个组成型表达的持家蛋白。正是由于这个原因,GAPDH 的 mRNA 和蛋白通常在对其它有变化的靶蛋白测定实验时作为对照。当代谢信号通路受到影响时 GAPDH 不适合做内参等。

8.球形微管蛋白亚基包含微管建筑块,由 α/β-tubulin 异源二聚体形成所有真核细胞的 tubulin 亚单位。 对抗微生物和抗有丝分裂药物耐受性的不同而会导致 Tubulin 的表达发生变化 。

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参考文献

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文章来源:CST

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