​​

​​

​​图 1：首先，将目标蛋白和融合标签的 DNA 都插入到质粒中。然后对其进行转录和翻译，从而产生附着在融合标签上的目标蛋白。

为什么要考虑融合标签？

优点

缺点

标签揭秘：表位标签、亲和标签和荧光标签​

​

融合标签主要分为三类，适用于不同的应用：表位标签、亲和标签和荧光标签。

表位标签往往是短肽序列，可用于免疫学应用，如 Western Blot 和免疫共沉淀。

亲和标签一般较长，可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。

荧光标签可用于活细胞和死细胞，并广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。

标签揭秘选择 C 端还是 N 端？

​

选择将标签融合到目标蛋白的 C 端还是 N 端，很大程度上取决于蛋白本身：蛋白的折叠方式，以及您选择的末端是否有功能要求。例如，如果 C 端在蛋白内部折叠，那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小；或者，如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切，那么标签将从目标蛋白中移除。

如果您有资源或准备开展新型实验，最好同时克隆 C 端和 N 端标签的构造，从而确定最佳选择。一研究小组发现，与 N 端的标签融合蛋白相比， 更多的C端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙2。但是，需要强调的是，虽然 C 端标签蛋白的定位和表现往往符合预期，但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确，可通过免疫荧光进行检测；免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达，免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式3。

后续步骤​

如欲了解详细信息，请查看以下页面：

如果您考虑使用多个应用或需要移除标签，请阅读有关串联亲和纯化和标签剪切的详细内容。

如欲了解有关标签检测的详细信息，请访问检测和应用页面。

常见问答

是否应该使用某种特异性标签？

很遗憾，对于哪种标签或融合位置最适合您的实验这一问题，并没有明确的答案。我们建议您根据自己的目标和应用以及我们的指南选择起点4。

可考虑以下关键问题：

我需要在活细胞中观察蛋白。应该使用哪种标签？

如果您想在活细胞中观察蛋白，请使用荧光标签。可以使用的荧光标签有很多种，可根据需要检测多种蛋白。查看荧光标签页面，了解更多信息。

我想观察蛋白定位。应该使用哪种标签？

我们提供针对多种标签的优质一抗，但通常使用的是表位标签。阅读表位标签页面，了解更多信息。

哪些标签最适合纯化？

虽然有多种标签可用于纯化，但最常用的是亲和标签。阅读亲和标签页面，找出最适合您应用的亲和标签。

如果标签不起作用，我该怎么办？

如果您一开始没有获得最佳结果，可尝试改变标签的位置、改变或添加一个蛋白酶位点、修改连接序列或附加多个标签，从而利用每个标签的特性。此外，我们还在不断开发新型标签，旨在实现特定目的，或者在现有标签的特定属性的基础上进行改良。

哪里能查找常见标签的分子量？

您可以使用我们的图表来比较常见亲和标签、表位标签和荧光标签的分子量。

​​

融合标签抗体

亲和标签

HHHHHH

表位标签

References