单向免疫扩散实验 |
您所在的位置:网站首页 › fahey曲线 › 单向免疫扩散实验 |
一、实验材料 2%离子琼脂或生理盐水琼脂(内含2%NaN3)。 标准马抗人 IgG 血清(抗体)(北京生物制品研究所生产) 工作标准参考蛋白(北京生物制品研究所生产) pH7.2 PBS 打孔器(孔径3 mm)及打孔模板 微量加样器 湿盒(容器内加湿纱布或泡沫塑料) 已制备好的含有 1%马抗人IgG 抗体的琼脂板 1/50 稀释的单人份待检血清标本 二、实验方法 1、标准曲线的制备 (1)按照玻片的大小,准备制做琼脂板所需要的1%离子琼脂。首先分装其1/2 量的2%盐水琼脂,例如,用普通载玻片制做时需1%离子琼脂4 ml,在分装2%盐水琼脂时即为2 ml。溶化后置56℃~60℃ 水浴中平衡温度备用。 (2)稀释抗体,用pH7.2 的PBS 稀释标准抗人IgG 抗体,终浓度为抗体效价的一倍。例如,血清效价为1/140,原浓血清即应按1/70 稀释。并分装试管,其分装量应与2%盐水琼脂量相等。 (3)制备琼脂板:将已稀释的抗人IgG 抗体于56℃ 水浴中预热约半分钟,再倾注于已溶化并维持56℃~60℃ 的2%盐水琼脂管中,用拇指将管口堵紧。翻转试管1-2 次,将抗体与琼脂混合均匀(注意:抗体与琼脂混合时切勿产生气泡),即刻倾注于玻片上,待凝固后即可。 (4)打孔:将琼脂板置于模板上,在同一直线上用打孔器打孔5 个,孔距10 mm。 (5)稀释不同浓度的标准参考蛋白(工作标准):应根据制品说明进行稀释,例如:工作标准中免疫球蛋白含量,IgG 为100 单位/ml,80.4 微克/单位,其稀释范围为1/10、1/20、1/40、1/80 及1/160。 (6)加样:将已稀释的不同浓度的工作标准蛋白依次用微量加样器每孔加入10 ul。(注意:每一稀释度均应更换塑料吸头)。 (7)将加样的琼脂板放湿盒中,置37℃ 温箱,24 小时后观察结果。 (8)用量角规测量并记录沉淀环直径,然后以沉淀环直径为纵座标,以标准参考蛋白量(单位/ml)为横座标,绘制成标准曲线。 2. 人血清中 IgG 正常值的测定 (1)将已制备好的抗体琼脂板置打孔模板上,每一琼脂板可打孔4 个(孔径3 mm,孔距10 mm)。 (2)将单位正常人血清用pH7.2 PBS 分别作1/50 稀释。 (3)用微量加样器分别取1/50 稀释的单人份血清标本10 μl 加入孔中,每份标本应各加两孔。 (4)作好标记放湿盒中,置37℃ 温箱,24 小时后观察结果。 三、实验结果 测量各份标本的沉淀环直径并记录结果,然后用标准曲线测出每份标本所含IgG 的量(U/ml,),并换算为mg/ml。 单向免疫扩散示意图 展开 |
今日新闻 |
推荐新闻 |
CopyRight 2018-2019 办公设备维修网 版权所有 豫ICP备15022753号-3 |