Nrf2是一个对于氧化应激反应非常重要的转录因子，它会结合在位于许多细胞保护基因启动子区域的抗氧化反应元件（ARE）上。

   在正常情况下，Nrf2会被BCR（KEAP1）复合体泛素化修饰并在细胞质中降解。

   在氧化应激反应中，亲电子代谢物会抑制BCR（KEAP1）复合体活性，促进NFE2L2/NRF2与一类小的Maf蛋白形成异       二聚体，在细胞核内发生聚集现象。

   Nrf2也会通过调节β-珠蛋白增强子活性参与β-珠蛋白簇基因的转录激活。

   广谱表达

   成年肌肉、肾脏、肺、肝组织和新生胎儿肌肉组织中高表达。

   在正常情况下，Nrf2定位于胞质。

   在氧化应激反应，亲电试剂，化学激活剂刺激下，Nrf2在细胞核中聚集  。

   人（Q16236）：异构体1-3 ：65-68 kDa （预测）

   小鼠（Q60795）：67kDa（预测）

   大鼠（O54968）：异构体1-2 ：67-68 kDa （预测）

   Nrf2具有乙酰化，糖基化，磷酸化，泛素化修饰

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   在正常情况下，Nrf2会被泛素化修饰并在细胞质中降解， WB中难以检测。

   氧化应激反应，亲电试剂，化学激活剂和自噬会导致NFE2L2/NRF2在细胞核内聚集，所以适当的样本刺激处理对于WB     实验的成功至关重要。

   由于Nrf2 存在异构体及翻译后修饰，所以在 WB 实验中，检测到的Nrf2的分子量大小并非完全与预测的68 kDa一致。

   2 µM MG-132处理18小时的Hela或HepG2全细胞裂解液

   25 µM MG-132处理4小时的HCT 116全细胞裂解液

   30 µM tBHQ处理4小时的MDA-MB-231细胞核裂解液

   人源重组Nrf2蛋白（ab132356）

   未经刺激处理的正常Hela、HCT 116、HepG2等全细胞裂解液

关键控制点

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加足够量的蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     超声破碎处理细胞以富集靶标蛋白。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     至少上样 20μg 总蛋白进行电泳。

   转膜

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。

   抗体孵育

     强烈建议在进行WB实验时使用新鲜抗体，避免重复使用。