一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍

：

1.

柱回收试剂盒：

可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物

条带切下，用溶解

Buffer

彻底溶解，上包埋有纯化

填料

的纯化柱，离心，再洗

涤一次，离心后用洗脱

缓冲液

洗脱。全程不过

10

多分钟，得到的产物溶液可以

直接用于后继实验。

这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，

也是目

前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片段的回收。

2.

玻璃奶

/

纯化

填料

胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据

每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载

量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，

B

uffer

溶解，

(

区别在于这里

)

加入纯化填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤

沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来，离心，取上

清，

就是回收的产物。

这个方法适合各种不同大小的片段，

特别是大片段的回收，

但是操作就较前者复杂一些，

涉及到多次离心沉淀和取上清，

有可能会误吸了微

量的沉淀

;

另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。

后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，

这种柱子不带纯化填料，只有一层

过滤膜

，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被

甩掉，这样就避免了上述的问题。

3.

低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割

目的条带，在

TE

溶液中

65

度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这

个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，

由于乙醇沉淀需时较长，

而且低熔点琼脂糖

价格较高现在用的人已经不多了，除非用于大片段的回收。

4.

透析带

电洗脱

法。切下的条带放在充满

TAE

的透析带中再电泳一段时间，让

DNA

走出凝胶，走向溶液中，

再反向电泳一会儿，将附在透析带上的

DNA

赶回

溶液中，取溶液部分，再用

TAE

洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那

块胶通常还要再染色看看残留。

由于绑透析带非常难搞，

只有在万不得已的非常

大的片段时才会考虑的。

也是丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一

。

以色列的

一个小公司

GeBA

出了一种简易透析管，就是将小管两边各开一小窗，贴上

透

析膜

，把胶块放在管中再电泳。由于不需要绑透析带，使用方便

;

而且管中溶液

体积小，容易处理

;

膜的面积也小吸附也少

;

顿时觉得是救星。

Pierce

也推出了类

似的东西，买起来更方便一点。

5.DEAE

纤维素膜纸片法和其他改良法。早期实验室最常用方法之一。将

DEAE

纤维素膜裁成小条活化处理。电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的

DE

AE

纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的

DNA

被膜片截

留，取出膜片冲洗后转移到

离心管

中加缓冲液

65

度保温洗脱，直到膜上没有

D

NA

了，

将溶液用酚氯仿抽提沉淀。

这个方法不适合做较大的

DNA

，

因为洗脱比

较困难。