计算和评估ELISA数据 |
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吸光度值落在标准曲线范围外的样品 要获得准确的结果,应先稀释这些样品,再继续进行ELISA染色。若使用这类样品,在分析结果时须将由标准曲线获得的浓度乘以稀释倍数。 计算变异系数变异系数(CV)为标准差σ与平均数µ的比值: Cv= σ µ 这一数据即为方差占平均数的百分比,代表了结果的不一致性和不准确性。方差越大表示结果的一致性和准确性越差。有些计算机程序能够计算ELISA结果的CV值。 CV较大可由以下原因引起: 移液不准确;在使用前确保枪头在移液器上套牢,确保吸取正确的液体量试剂溅入其他孔中样本或试剂受细菌或真菌污染试剂间交叉污染酶标板各处温度不一致;确保酶标板在远离气流的恒温环境中孵育部分孔干透;确保酶标板在孵育过程中始终处于被封盖状态加标回收率加标回收率可判断的样品成分对抗体抗原检测的影响。例如,组织培养物上清液中所含的大量蛋白质可能会阻碍抗体结合,提高信噪比,从而导致得到的浓度低于实际值。 将已知浓度的蛋白质加至样品基质和标准稀释剂中。用同样的测定方法对加标蛋白质进行定量,并将样品基质和标准稀释剂的结果进行对比。 如果二者结果相同,那么样品基质可视为适用于测定程序。如果回收率不同,则说明样品基质中的组分会干扰分析物检测。 如果加标回收实验说明样品基质对结果有影响该怎么办? 我们推荐在样品基质中稀释标准品以得到标准曲线。样品基质对结果的一切影响也存在于标准品中,因此标准曲线和样品间的比较更为准确。我们许多的ELISA试剂盒中包含专为此提供的标准血清稀释剂。 另一解决方法则是改变样品基质。例如,如果使用未稀释的生物样品,可在标准稀释剂中稀释样品。然而使用此方案,您需要确保在分析结果时将稀释倍数考虑在内,并且浓度保持在标准曲线的线性区域内。 查看更多ELISA 试剂盒、试剂和实验方案或查看我们的膜抗体芯片,例如可用于同时测定多种蛋白质的细胞因子芯片ab133997。 |
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