试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。 1. 制作标准曲线 a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞； b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔； c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

2. 细胞活性检测 a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时； b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ； c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时； d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

3. 细胞增殖-毒性检测 a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时； b. 向培养板加入不同浓度的待测药物； c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间； d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ； e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时； f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

4. 计算公式 细胞存活率 =[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率 =[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ； Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ； Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

CCK-8 试剂盒检测细胞活性

注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。