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作者：

陈龙冠

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摘要：

人类表皮生长因子受体2(HER2),是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体样蛋白,在细胞生长、存活和分化过程中扮演着极其重要的角色。部分乳腺癌、胃癌、卵巢癌患者中均存发现HER2过度表达现象。近年来一系列针对HER2的肿瘤治疗策略相继被建立,其中包括被动免疫治疗(如抗HER2抗体)和主动免疫治疗(如靶向HER2的肽疫苗),目前国外已有多个基于HER2的肿瘤多肽疫苗陆续展开相关临床试验。针对HER2的肿瘤多肽疫苗序列来源于HER2的表位肽片段,具有特异性强、安全性高的优点。理论上可诱导持久的特异性细胞和体液免疫应答,在动物模型中,预免疫的多肽疫苗具有免疫原性,可诱导CD4和CD8阳性的T淋巴细胞免疫,以抑制HER2阳性肿瘤细胞生长。我们所合成的两种多肽分子CKL9、YL20,都来源于HER2的表位肽,其中CKL9在原有序列基础上加入半胱氨酸环化,YL20为原有序列连接穿膜肽改造而成,能够提高多肽的稳定性,增加表位肽进入细胞的能力。与传统疫苗相比,肿瘤多肽疫苗具有易于合成纯化、安全性高、特异性强等优点,因此肿瘤多肽疫苗是目前肿瘤疫苗研究的热点之一。本研究从来源于HER2表位肽片段出发,筛选和改造了分别含有11、20个氨基酸的多肽分子,在细胞水平和动物水平相关实验中,验证了多肽疫苗CKL9和YL20具有抗HER2阳性肿瘤的活性。本研究中的多肽疫苗CKL9、YL20在体外孵育巴比斯(Balb/c)小鼠淋巴细胞情况下能刺激诱导淋巴细胞的增殖,增殖效果随孵育时间而明显提高,相对增殖率最高可达16.7%(CKL9)和17.1%(YL20),但淋巴细胞增殖效果与孵育多肽疫苗CKL9的浓度并无明显线性关系。在酶联免疫斑点(ELISPOT)检测实验中,体外孵育多肽疫苗CKL9和YL20的淋巴细胞皆出现一定数目的免疫斑点,免疫斑点对应每个释放γ-干扰素的淋巴细胞,同时斑点数目与孵育浓度呈正相关,其中孵育CKL9(50ug/ml)和YL20(50ug/ml)分别捕获30.3和37个γ-干扰素因子的释放,与孵育PBS空白对照组7.3个相比,具有显著性差异。对表达不同程度HER-2的肿瘤细胞的体外抑制实验发现,被CKL9、YL20诱导的淋巴细胞在高效靶比时均能对HER2阳性肿瘤细胞产生高特异性杀伤,却对HER-2阴性表达的细胞几乎无毒性作用。其中,两种多肽疫苗所诱导激活的细胞毒性T淋巴细胞均能对N87肿瘤细胞产生80%以上的杀伤,对SKOV-3产生30~50%的杀伤,说明具有HER2特异性。在小鼠体内肿瘤实验中,设置了两种实验给药方案,其中,小鼠后免疫这种给药方式从结果显示来看,多肽疫苗没有充分发挥免疫调节的作用。相反,在小鼠预免疫的体内肿瘤实验中,相比阴性对照组,预免疫多肽疫苗的实验组小鼠肿瘤增长速度缓慢,两实验组相对肿瘤抑制率可达11.4%(YL20)和32.3%(CKL9),说明预免疫CKL9、YL20能诱导小鼠产生特异性细胞免疫,通过记忆T细胞产生较持久的免疫反应,进而能有效地抑制HER-2阳性肿瘤生长。

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关键词：

HER-2；多肽疫苗；T淋巴细胞；免疫应答；N87移植瘤；抗肿瘤活性

学位级别：

硕士

DOI：

CNKI:CDMD:2.1017.866467