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来源：检验医学网

作者：朱征 李慧 马宇

单位：四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院 检验科

在临床微生物学检验中，我们经常需要对细菌进行计数，测定细菌数量的方法有很多，不同的细菌计数方法使用不同的计数单位。我们常见的细菌计数单位有个/ml、mcf、cfu/ml、ccu/ml，那这些计数单位的含义及所使用的计数方法，你都了解吗？

1、个/ml

个/ml是指每毫升标本里面有多少个细菌。使用个/ml作为细菌计数单位的细菌计数方法是计数器法。

1.1细菌计数板：细菌计数板和血球计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察；而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清[1]。

取一定体积的样品细菌悬液置于细菌计数板的计数池内，用显微镜观察计数。由于计数池的容积是一定的(0.02mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子也可采用血球计数板进行计数。

1.2电子计数器：电子计数器的工作原理类似于血细胞分析仪，测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细菌，当一个细菌通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上[2]。该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。

2、mcf

mcf是麦氏浊度单位。McFarland发明了一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管，具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的，有表可查[3]。0.5ml氯化钡（1.17%）加入99.5ml硫酸(1%），所得溶液浊度即为0.5麦氏单位。0.5麦氏浓度菌液是临床微生物药敏实验常用浓度，通常认为，如将配菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时，相当于1.5×108细菌数/ml。使用mcf作为细菌计数单位的细菌计数方法是比浊法。

2.1麦氏比浊管：麦氏比浊管可以自己配制，也可购买商品化标准麦氏比浊管，将制备的菌悬液与0.5麦氏浊度的标准麦氏比浊管比较，浊度相同即为0.5麦氏浓度的菌液。该方法使用肉眼观察浊度，误差较大。

2.2麦氏比浊仪：麦氏比浊仪是一种采用麦氏比浊法的自动化分析仪器，以其灵敏、准确、快捷的优点逐渐取代人工法成为细菌浊度测定的主要工具。麦氏比浊仪测量细菌溶液样品并直接显示麦氏单位浊度值，根据国际通用麦氏单位浊度值与细菌数的关系即可换算出细菌浓度[4]。比浊法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。

2.3分光光度计：一般实验室有分光光度计也可以测细菌悬液的浊度，根据美国CLSI（以前称NCCLS）推荐的方法，将菌液调整至OD（625）值在0.08-0.13之间就相当于0.5麦氏浊度了[5]。但是，由于不同细菌折光率是不同的，所以这只是一种粗略的换算关系，只具有一定的参考价值。

使用麦氏比浊仪和分光光度计进行细菌计数的优点是简便、迅速，可以连续测定，适合于自动化检测。但是，由于光密度或透光度除了受菌体浓度影响之外，还受细菌细胞大小、形态、培养液成分以及所采用的光波长等因素的影响。因此，比浊法只是一种比较粗略的细菌总数测量方法。

3、cfu/ml

cfu是菌落形成单位，是指由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，是计算细菌或霉菌数量的单位[6]。cfu/mL指的是每毫升样品中含有的细菌菌落总数。菌落形成单位的计数方式与前两种计数方式不同，前两种方法会将活与死的细菌全部算入，但是cfu只计算活的细菌。使用cfu/mL作为细菌计数单位的细菌计数方法是平板菌落计数法（cfu法）。

平板菌落计数法：取一定容量的细菌悬液，制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1ml置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每ml原始样品中所含细菌菌落总数[7]。此法灵敏度高，是临床微生物检验工作中最常用的活菌计数法。

4、ccu/ml

ccu是颜色改变单位，以微生物在培养基中的代谢活力为指标，根据培养基颜色的改变来计数微生物数量的单位[8]。使用ccu/ml作为细菌计数单位的细菌计数方法为ccu法。

ccu法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等。因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。

下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作[9]：

1、取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。2、在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管。3、于37℃培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml，即10^6CCU/ml。

一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。

临床细菌计数方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在临床微生物检验工作中一般常用的是平板菌落计数法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件、检验目的而定。

【参考文献】

[1] 韩翠翠.例析显微镜直接计数法和稀释涂布平板法[J].实验教学与仪器,2016,33(01):32-34.

[2]郑万强.细菌学培养的新进展[J].中国现代医生,2009,47(30):6-7+29.

[3]张彩萍. PCR-RFLP分析分枝杆菌Hsp65基因时三种凝胶电泳的比较研究及临床应用[D].中国协和医科大学,2009.

[4]万滔.基于麦氏比浊原理的细菌浊度分析仪校准方法探讨[J].计量与测试技术,2018,45(07):117-119.

[5]余柏增. 5种碳青霉烯酶基因多重PCR技术的建立及临床应用[D].南方医科大学,2020.

[6]葛婷婷. 肝脓肿DWI改变及其大肠杆菌作用的相关研究[D].上海交通大学,2017.

[7]徐蕾蕊,付溥博,汪琦,李丹,马丹,陶文靖,曲连海,贾晨,曾静.测试片法在食品菌落总数检测中的应用研究[J].食品安全质量检测学报,2021,12(02):472-478.

[8]王玉梅,李尔华,曾灵风,刘艳,高尚先.人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品的制备[J].中国生物制品学杂志,2014,27(08):1042-1047.

[9]郑冰洁. 生殖道支原体流行病学研究及BALB/c小鼠下生殖道感染模型建立[D].北京协和医学院,2014.

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