Q1：待测药物本身具有氧化性或还原性时，如何进行操作？

A1：如果待测药物本身具有氧化性或还原性，可在加入CCK-8 Solution 之前更换新鲜的培养基，以去除待测药物的影响。当待测药物影响比较小时，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

Q2：实验过程中，处理细胞用的不是96孔板，如何确定加入CCK-8 Solμtion 的体积？

A2：CCK-8 Solution 的加入量是细胞板中每孔的培养基体积的10%，按照该比例进行换算即可。如果是使用384孔板进行细胞增殖与活性的检测，建议先将CCK-8 Solution 用ddH2O 稀释1倍后，加入细胞板中每孔培养基的20% 体积即可。

Q3：测得的吸光值很低，如何解决？

A3：（1）增加细胞数量

（2）延长加入CCK-8 Solution 后孵育的时间（一般是1-4h）。

Q4：空白对照（培养基+CCK8）检测出来吸光度值在1以上，实验组检测出来吸光度值在2左右，什么原因导致空白对照检测出来的吸光值在1以上？

A4：（1）正常情况下，空白对照的吸光度值仅在0数值范围，测出来数值偏大

可能是培养基造成的原因，实验时可去掉培养基对照的本底值；另外一个原因可能是体系中存在污染；

（2）污染可先检查培养基，可通过显微镜观察培养基是否染菌；

（3）若是染菌，可更换新的培养基，或者使用0.22 μm/0.45 μm的滤膜过滤，除去细菌的影响。

Q5：做完第二步铺完细胞后需要放置24h等贴壁后再加入溶液吗？

A5：不需要，直接加入CCK8孵育1-4h，然后检测。

Q6：细胞活力的数据分析（细胞活力% = (加药细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD) × 100%），每个浓度只有一个活力值（各复孔取平均值），还是有多少个复孔就有多少个细胞活力（每一个复孔算一个活力）？

A6: 建议有多少个复孔就有多少个细胞活力（每一个复孔算一个活力），方便做bar值分析。

Q7：接种至96 孔细胞板中的细胞数量应该是多少

A7：贴壁细胞至少1000个/孔(100 μl培养基)，白细胞至少2500个/孔(100 μl培养基)。建议实验前设定几个不同细胞数量的孔进行条件摸索。