40种常用细胞培养基配方 |
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31营养琼脂 成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15~20g 蒸馏水 1000mL 制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。 注:此培养基可供一般细菌 培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。 32营养肉汤 成分: 蛋白陈 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min。 33 乳糖胆盐发酵管 成分: 蛋白胨 20g 猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g 乳糖 10g 0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。 注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。 34乳糖发酵管 成分: 蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL pH7。4 制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。 注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。 ②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。 35 EC肉汤 成分: 胰蛋白胨 20g 3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g 乳糖 5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9%26plusmn;0.2。 36 缓冲蛋白胨水(BP) 成分: 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 磷酸氢二钠(Na2HPO4%26bull;12H2O) 9g 磷酸二氢钾 1.5g 蒸馏水 1000mL pH7.2 制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。 注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 甲液 胰蛋白胨 5g 氯化钠 8g 磷酸二氢钾 1。6g 蒸馏水 1000mL 乙液 氯化镁(化学纯) 40g 蒸馏水 100mL 4。13.3 丙液 0。4%孔雀绿水溶液。 制法:分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可。 注:本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 基础培养基 多胨或眎胨 5g 胆盐 1g 碳酸钙 10g 硫代硫酸钠 30g 蒸馏水 1000mL 碘溶液 碘 6g 碘化钾 5g 蒸馏水 20mL 制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL。 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 基础液: 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 3g 碳酸钙 45g 蒸馏水 1000mL 将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0%26plusmn;0.1,121℃高压灭菌20min。 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠(Na2S2O3%26bull;5H2O) 50g 蒸馏水 加至100mL 碘溶液 碘片 20g 碘化钾 25g 蒸馏水加至 100mL 将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量。贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用。 煌绿水溶液 煌绿 0.5g 蒸馏水 100mL 存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。 牛胆盐溶液 干燥的牛胆盐 10g 蒸馏水 100mL 煮沸溶解,121℃高压灭菌20min。 制备: 基础液 900mL 硫代硫酸钠溶液 100mL 碘液 20mL 煌绿溶液 2mL 牛胆盐溶液 50mL 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL。 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 成分: 蛋白胨 5g 乳糖 4g 亚硒酸氢钠 4g 磷酸氢二钠 5.5g 磷酸二氢钾 4.58 L-胱氨酸 0.01g 蒸馏水 1000mL 1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。 制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0%26plusmn;0.1。 41 GN增菌液 成分: 胰蛋白胨 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 柠檬酸钠 5g 去氧胆酸钠 0.5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.0 制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min。 42 肠道菌增菌肉汤 成分: 蛋白胨1 10g 葡萄糖 5g 牛胆盐 20g 磷酸氢二钠 8g 磷酸二氢钾 2g 煌绿 0.015g 蒸馏水 1000mL pH7.2 制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶30mL,115℃高压灭菌15min。 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 葡萄糖 5g 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4g 煌绿 0.025g 柠檬酸铋铵 2g 亚硫酸钠 6g 琼脂 18~20g 蒸馏水 1000mL pH7.5 制法: 1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。 2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。 3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃ 4 将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀。冷至50~55℃,倾注平皿。 注:此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热。以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。 44 DHL琼脂 成分: 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 乳糖 10g 蔗糖 10g 去氧胆酸钠 1g 硫代硫酸钠 2.3g 柠檬酸钠 1g 柠檬酸铁铵 1g 中性红 0.03g 琼脂 18~20g 蒸馏水 1000mL pH7.3 制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH。 再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃,倾注平板。 45 HE琼脂 成分: 脙胨 12g 牛肉膏 3g 乳糖 12g 蔗糖 12g 水杨素 2g 胆盐 20g 氯化钠 5g 琼脂 18~20g 蒸馏水 1000mL 0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL Andrade指示剂 20mL 甲液 20mL 乙液 20mL pH7.5 制法:将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内,加热溶解。加入 甲液和乙液于基础液内,校正pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。 注:①此培养基不可高压灭菌。 ②甲液的配制 硫代硫酸钠 34g 柠檬酸铁铵 4g 蒸馏水 100mL ②乙液的配制 去氧胆酸钠 10g 蒸馏水 100mL ②Andrade指示剂 酸性复红 0.5g 1mol/L氢氧化钠溶液 16mL 蒸馏水 100mL 将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。 46 SS琼脂 基础培养基: 牛肉膏 5g 眎胨 5g 三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。 完全培养基: 基础培养基 100mL 乳糖 10g 柠檬酸钠 8.5g 硫代硫酸钠 8.5g 10%柠檬酸铁溶液 10mL 1%中性红溶液 2.5mL 0.1%煌绿溶液 0.33mL 加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。 注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用。 ②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。 ③可以购用SS琼脂的干燥培养基。 47 WS琼脂 成分: ②胨 12g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 乳糖 12g 蔗糖 12g 十二烷基硫酸钠 2g 琼脂 15g Andrade指示剂 20mL 0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL 甲液 20mL 蒸馏水 1000mL pH7.0 制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色。 注:①供沙门氏菌分离用。 ②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。 48 麦康凯琼脂 成分: 蛋白胨 17g 眎胨 3g 猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 乳糖 10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 制法: 1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。 2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。 注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 成分: 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 17g 2%伊红Y溶液 20mL 0.65%美蓝溶液 10mL 蒸馏水 1000mL pH7.1 制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。 50三糖铁琼脂(TSI) 成分: 蛋白胨 20g 牛肉膏 5g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2?6H2O〕 0.2g 硫代硫酸钠 0.2g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。 51 三糖铁琼脂(换用方法) 成分: 蛋白胨 15g 眎胨 5g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0.3g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 上层培养基成分 血消化汤(pH7.6) 500mL 琼脂 6.5g 硫代硫酸钠 0.1g 硫酸亚铁铵 0.1g 乳糖 5g 0.2%酚红溶液 5mL 下层培养基成分 血消化汤(pH7.6) 500mL 琼脂 2g 葡萄糖 1g 0.2%酚红溶液 5mL 制法: 1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解。 2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm%26times;100mm试管内,每管约2mL。115℃高压灭菌10min。 3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。 4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面。 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 成分: 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。 54 葡萄糖半固体发酵管 成分: 蛋白胨 1g 牛肉膏 0.3g 氯化钠 0.5g 1。6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL 葡萄糖 1g 琼脂 0.3g 蒸馏水 100mL pH7.4 制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃ 15 min。 55 5%乳糖发酵管 成分: 蛋白胨 0.2g 氯化钠 0.5g 乳糖 5g 2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL 蒸馏水 100mL pH7.4 制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。 注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。 56 CAYE培养基 此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤。 57 Honda氏产毒肉汤 成分: 水解酪蛋白 20g 酵母浸膏粉 10g 氯化钠 2.5g 磷酸氢二钠 15g 葡萄糖 5g 微量元素 0.5mL 蒸馏水 1000mL pH7.5 制法:溶解后校正pH,高压灭菌121℃ 15min,待冷至45~50℃时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含90%26mu;g。 微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 成分: 胨 20g 麦芽糖 3g 乳糖 0.7g 氯化钠 5g 琼脂 15g 40%氢氧化钠溶液 1.5mL 蒸馏水 1000mL pH7.8 制法:用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合,分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 成分: 甲液:胰蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL 乙液:磷酸氢二钠 9.5g 蒸馏水 1000mL 丙液:氯化镁(MgCl2%26bull;6H2O) 40g 蒸馏水 400mL 以上分别在121℃灭菌15min。 丁液:孔雀绿 0.2g 蒸馏水 100mL 戊液:羧苄青霉素 1mg/mL 制法:取甲液620mL,乙液160mL,丙液212mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即为1000mL培养基。分装灭菌烧瓶,每瓶100mL,或灭菌试管10mL。 60 胰蛋白胨水 成分: 胰蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL pH7.0 制法:将上述成分溶解,校正pH。分装试管,121℃高压灭菌15min。 61 Rustigian氏尿素培养液 成分: 尿素 20.0g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g 酚红 0.01g 蒸馏水 1000mL 制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8%26plusmn;0.2。 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为约3mL。 用途:尿素酶试验用。 62 氯化钠结晶紫增菌液 成分: 蛋白胨 20g 氯化钠 40g 0.01%结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH9.0 制法: 除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4。5mL,校正pH。加热煮沸,过滤。再加入结晶紫溶液,混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。 63 氯化钠蔗糖琼脂 成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 50g 蔗糖 10g 琼脂 18g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL 蒸馏水 1000mL pH7.8 制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热溶解,过滤。加入指示剂,分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板。 64 嗜盐菌选择性琼脂 成分: 蛋白胨 20g 氯化钠 40g 琼脂 17g 0.01%结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH8.7 制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH。加入琼脂,加热溶解。再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶100mL。 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 成分: 三糖铁琼脂 1000mL 氯化钠 30g 制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。 66 氯化钠血琼脂 成分: 酵母膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 70g 磷酸氢二钠 5g 甘露醇 10g 结晶紫 0.001g 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL 制法:调pH8.0加热30min(不必高压),待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血(5%~10%)混合均匀,倾注平皿。 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%,pH为7.7。 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 成分: 磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g 磷酸二氢钠(NaH2PO4?H2O) 1.2g 氯化钠(NaCl) 5.0g 三号胆盐 1.5g 山梨醇 20g 制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min,备用。 69 CIN-1培养基 基础培养基 胰胨 20.0g 酵母浸膏 2.0g 甘露醇 20.0g 氯化钠 1.0g 去氧胆酸钠 2.0g 硫酸镁(MgSO4?7H2O) 0.01g 琼脂 12.0g 蒸馏水 950mL pH7.5±0.1 将基础培养基高压灭菌。 Irgasan 以95%的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成0。4%的溶液,待基础液冷至80℃时,加入1mL混匀。 冷至50℃时,加入: 中性红(3mg/mL) 10.0mL 结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL 头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL 新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL 最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶,倒平皿。 70 嗜盐性试验培养基 成分: 蛋白胨 2g 氯化钠 按不同量加 蒸馏水 100mL pH7.7 制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min |
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