碧云天生产的生物素定量检测试剂盒(荧光法)，即Biotin Quantitation Assay Kit (Fluorometric)，是基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)技术，通过生物素(Biotin)的强竞争使淬灭剂HABA与FITC荧光染料标记的Streptavidin解离，导致在激发光(Excitation, Ex) 492nm/发射光(Emission, Em) 520nm处的荧光值升高，从而定量检测蛋白、多肽、DNA、RNA或小分子化合物等被生物素标记的水平或样品中生物素浓度的试剂盒。

生物素定量检测试剂盒，也被称为生物素标记定量检测试剂盒(Biotin Labeling Quantitation Assay Kit)、生物素化水平检测试剂盒(Biotinylation Level Assay Kit)或生物素标记效率检测试剂盒(Biotin Labeling Efficiency Assay Kit)。

HABA，即4-Hydroxyazobenzene-2'-carboxylic Acid，中文名称为4'-羟基偶氮苯-2-羧酸，是一种小分子化合物，CAS号为1634-82-8，分子式为C13H10N2O3，分子量为242.23，是一种能与链霉亲和素发生弱相互作用的染料。荧光染料(Fluorescent dye, F)标记的Streptavidin与HABA (Quencher, Q)形成复合物，因为荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)，Streptavidin上标记的荧光基团被淬灭(左)。与生物素和链霉亲和素的高亲和力(Kd=1×10-15M)相比，HABA和链霉亲和素的亲和力较弱(Kd=5.8×10-6M)，所以生物素、生物素标记的蛋白、多肽、DNA、RNA或小分子化合物等可通过强竞争置换HABA，导致激发光(Excitation, Ex) 492nm/发射光(Emission, Em) 520nm的荧光值升高，荧光值与样品的生物素摩尔量成正相关(图1) [1-2]，即荧光信号越强，样品的生物素化越高。

图1. 碧云天生物素定量检测试剂盒(荧光法) (P0373)的工作原理图。

本试剂盒应用范围宽。不仅可以检测生物素标记的蛋白，也可以检测生物素标记的多肽、DNA、RNA或小分子化合物以及样品中的生物素浓度。

本试剂盒操作简单，检测速度快。完成检测仅需约5分钟，不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

本试剂盒灵敏度高。按照每孔100μl反应体系，本试剂盒检测生物素浓度的下限为40nM (4pmol)，通常每孔仅需要50ng-1μg生物素标记的蛋白或5-100pmol生物素标记的多肽、DNA、RNA或小分子化合物，荧光法相比于显色法(P0371)的灵敏度提高约50倍。

按使用说明操作，本试剂盒小包装可以检测100个样品，中包装可以检测500个样品。

-20℃保存，一年有效。其中HABA/Streptavidin-FITC Premix须避光保存。

Reaction Buffer在-20℃保存后融化若有沉淀析出，可37℃水浴加热直至完全溶解。

所有试剂需完全解冻并平衡至室温后再使用，使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。

Biotin-BSA (Positive Control)仅作为生物素标记的阳性对照，不提供具体的生物素标记数量。

检测时建议使用96孔黑板，推荐选购碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。