【科研】BCA法测蛋白浓度（详细🔎步骤！！）BCA法测蛋白浓度测定工作原理：Thermo Scientific Pierce BCA蛋白定量分析试剂盒是一种基于二喹啉甲酸(BCA)利用比色法测定总蛋白浓度的蛋白定量试剂盒，可与去污剂兼容。本方法将双缩脲反应和显色反应结合在一起:前者为在碱性介质中，蛋白质可将Cu2+还原成Cu1+的反应，后者为使用含有二喹啉甲酸(BCA)的独特试剂，利用比色法检测Cu1+，具有高灵敏度和高选择性的特点。此检测方法中产生的紫色显色物质是由两分子的BCA和一分子的亚铜离子整合而形成的。该水溶性复合物在562nm处具有很强的吸光值，在很宽的蛋白质浓度范围(20-2000ug/mL)内，吸光值和蛋白质浓度具有良好的线性关系。📌A. 梯度稀释牛血清白蛋白（BSA）标准品制备一组蛋白质标准品。将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的EP管中，最好使用与待测样品相同的稀释液。‼️具体配制见上图P5📌B. 制备BCA工作液1⃣️使用下述公式来确定所需的工作液总体积：（标准品的个数+待测蛋白质样品的个数）×（实验重复次数）×（用于每个样品的工作液的体积200ul）=所需的工作液总体积2⃣️将50份BCA试剂A与1份BCA试剂B混合（试剂A与试剂B的比率=50：1）制备工作液。当试剂B加入到试剂A中时，开始可观察到有浑浊产生，经搅拌后浑浊会迅速消失，得到绿色澄清工作液。📌C.微孔板方案（样品与工作液的比例=1：8）1⃣️取各个稀释浓度的蛋白质标准品和待测蛋白质样品（按需稀释）各25uL，加入到微孔板中（检测范围=20-2000μg/mL）。2⃣️在每一个孔中加入200uL工作液，并在震荡器上震荡30秒，使其充分混合。3⃣️将微孔板密封，在37℃孵育30分钟。4⃣️将微孔板冷却到室温。测量样品在562nm处的吸光值。5⃣️将各个标准品和待测蛋白质样品在562nm处的吸光值减去空白标准品在562nm处的平均吸光值。6⃣️将BSA标准品在562nm处经过空白校正的平均吸光值对其浓度(ug/mL)作图，绘制标准曲线。

耗材是的！高级灰配色真的太好看了！而且质量也是不错的