碧云天生产的Mouse AFP ELISA Kit (Mouse α-Fetoprotein Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠甲胎蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的AFP的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为59pg/ml，与小鼠Leptin、Resistin、Prolactin及人的α-Fetoprotein均没有交叉反应性。板内、板间变异系数均小于10%。

甲胎蛋白(α-Fetoprotein, AFP)是类白蛋白超家族(Albuminoid superfamily)的成员，是一种胎儿和肿瘤相关蛋白，被认为是某些癌症和先天性缺陷的标志物。在人类和啮齿动物中，它是66-72kDa的单链糖蛋白。小鼠AFP与大鼠和人AFP的氨基酸序列同源性分别为81%和65%。胎儿主要通过肝脏、卵黄囊和胃肠道组织合成AFP。在小鼠发育过程中，AFP在前肠内胚层中以低但可检测到的水平表达，在形成肝芽的肝母细胞中高度激活，是肝细胞谱系的最早标记之一。AFP血清水平在胚胎发育的第10至13周达到峰值，然后在整个妊娠期下降。相反，主要来源于胎儿循环的母体血清AFP持续增加到妊娠晚期[1-2]。

AFP可以作为载体蛋白，结合多种配体，包括类固醇、胆红素、脂肪酸、维甲酸和类黄酮。在啮齿动物中，AFP隔离内源性雌激素并阻断雌激素受体(Estrogen receptor, ER)介导的反应。AFP还具有免疫抑制活性，调节细胞增殖和凋亡，启动细胞内信号传导，并有助于细胞入侵的作用。

胎儿和母体AFP水平的改变与几种先天性异常有关，包括甲状腺功能减退、自身免疫性疾病和心脏缺陷。AFP被广泛用作神经管缺陷和染色体异常的产前筛查标记。母亲血清AFP水平低与唐氏综合征的高发病率相关，而AFP较高水平与脊柱裂和无脑畸形相关[2]。此外，AFP是肝细胞癌的常用标志物，其水平升高与肝母细胞瘤、生殖细胞瘤和某些胃癌相关[3,4]。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测 样品中小鼠AFP的浓度，其原理见图1。小鼠AFP特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠AFP会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠AFP抗体后，生物素化抗小鼠AFP抗体与小鼠AFP结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠AFP浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图 。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。