原标题：POROS疏水填料去除双特异性抗体聚体——工艺设计与去除机理

双抗项目聚体多，一不小心就中招

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今天羊驼博士就带大家一起看看

POROS的疏水填料

在流穿模式下对双抗项目中聚体去除的

效果及背后隐藏的机理

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简 介

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减少和控制产物相关杂质是双特异性抗体纯化工艺开发过程中的主要挑战。目标产物变体（例如聚体和片段）去除的困难源于它们性质的相似性，相近的等电点、小的表面电荷差异和对不同盐盐和pH条件的疏水性。因此，许多双特异性抗体纯化过程需要多个步骤来减少杂质。这里研究了三种疏水相互作用层析（HIC）填料（POROS Ethyl，Benzyl和Benzyl-Ultra），用于去除基于大肠杆菌的表达系统（XpressCF+™）中产生的双特异性抗体的聚集体。进一步研究了POROS苯甲基疏水填料的最佳工艺参数。

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研究目标

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物料与耗材

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双特异性抗体：大肠杆菌无细胞系统 (XpressCF+™)表达的bsAb1

耗材：

设备和软件

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方 法

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图1 全部筛选的疏水填料的疏水性大小排序

图2 开发bsAb1纯化工艺的疏水填料从筛选到优化的7大主要步骤流程图

筛选琼脂糖基架疏水填料

图3 疏水填料筛选每步收率图

POROS 疏水填料筛选

图 4. UPLC-SEC 分析上POROS填料上样流穿液表1 三种疏水填料在聚体去除上的对比

POROS Benzyl优化

测试条件：

图5 POROS Benzyl 两种规模下流穿模式重叠图谱

注：Strip1 with water, strip2 with 1M acetic acid, CIP with 1M NaOH

表二 POROS Benzyl 在放大180倍后的聚体去除一致性

高载量下聚体去除

实验条件：

方框内的上样载量可以使高聚体去除15-20% ，单体回收率在 75-85%之间。

图6 双抗聚体在POROS Benzyl填料FT模式下的流穿

bsAb1 双抗聚体在疏水填料上的去除机理

图7 疏水填料去除双抗聚体机理示意图

图7 第一根柱子可以看出：

在柱子上的结合力：单体 和 片段< 聚体

在柱子中的流动性：单体 和 片段 > 聚体

从第二根柱子可以看出：

聚体把结合在柱子上的单体置换出来。

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总 结

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1、文章显示POROS 填料在优化好的条件下可以在维持高单体回收率的同时具有去除聚体的优越能力。

2、POROS Benzyl 流穿模式可以去除 >10-20% 聚体（取决于上样量），可以很好的作为中间层析步骤。

3、研究结果表明，在有效分离双特异性抗体和其聚集体的过程中，聚集体的去除可以通过流穿模式取代吸附洗脱模式。

4、聚体去除能力在高上样量下具有很高的一致性。返回搜狐，查看更多

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