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作者：

王荣

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摘要：

本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分 实验研究野生型 VHL基因提高肾细胞癌细胞株786-O对 TRAIL敏感性的基础研究 目的:91%的散发性肾细胞癌患者中存在肿瘤抑制基因 von Hippel-Lindau(VHL)的突变或失活.VHL基因以及翻译的产物 pVHL能够在转录和翻译水平调节多种与肾细胞癌发生发展相关基因的表达,但与 TRAIL介导的肿瘤细胞凋亡之间的关系并不明确,本次研究的目标是在肾细胞癌786-O细胞株上明确野生型 VHL基因在 TRAIL介导的肿瘤细胞凋亡中的作用. 方法:选用肾细胞癌786-O细胞株,单克隆携带野生型 VHL基因全长 DNA的786-O/VHL细胞以及单克隆携带 VHL基因不同类型突变 DNA的786-O细胞,采用不同浓度的人重组 TRAIL和40ug/ml的TRAIL作用不同的时间,利用MTT和流式细胞术来检测上述细胞株对 TRAIL介导肿瘤细胞凋亡的敏感性以及野生型 VHL基因是否具有提高786-O细胞对 TRAIL敏感性的能力.RT-PCR和Western-Blot用于分析死亡受体 DR4,DR5以及凋亡抑制蛋白 c-FLIP(L)在转录和翻译的表达水平.为了准确阐明 c-FLIP(L)和TRAIL介导786-O/VHL细胞凋亡的相关性,用脂质体2000将 c-FLIP(L)转染到对 TRAIL敏感的786-O/VHL细胞中,观察高表达的c-FLIP(L)和TRAIL敏感性的关系.同时利用DR4和DR5的拮抗抗体来观察两种死亡受体和野生型 VHL基因的关系. 结果:MTT检测表明表达野生型 VHL基因的786-O/VHL细胞对 TRAIL介导的凋亡敏感,且存在剂量和时间依赖性,其余细胞株表现出对 TRAIL耐受.流式细胞仪结果表明:TRAIL(40ng/ml)处理24h后786-O/VHL细胞和786-O细胞发生凋亡的比率分别为30%和9%(P