胆汁三烯结合蛋白在大肠杆菌中的表达、复性与纯化

李晓芳

;

宁保安

;

胡红芳

;

杨丽丽

;

左佳

;

王彩红

;

高志贤

【期刊名称】

《生物技术通讯》

【年

(

卷

),

期】

2009(020)002

【摘

要】

目的

:

合成胆汁三烯结合蛋白

(BBP)

基因并在大肠杆菌中表达

,

获得重组

BBP

纯化制品

.

方法

:

根据天然

BBP

的基因序列和大肠杆菌偏好密码子设计并合成

BBP

基因的引物

,PCR

扩增优化的

BBP

基因序列

,

克隆至载体

pEasy-T3;

测序正确后

,

将该序列克隆至表达载体

pET-32a

上

,

构建表达质粒

,

转化至大肠杆菌

BL21(DE3)pLysS,

在

IPTG

诱导下表达融合蛋白

;

采用

Ni

柱纯化融合蛋白

.

结果

:PCR

扩增获得了优化后的

BBP

基因序列

,

构建了表达载体

pET-32a-BBP;SDS-PAGE

分

析表明表达的融合蛋白相对分子质量为

20×103,以包涵体形式存在

,

占全菌蛋白的

40%

以上

;

变性、复性后经

Ni2+

柱纯化

,

获得纯度达

98%

以上的重组蛋白

.

结论

:

优化

并合成了

BBP

全基因序列

,

获得了高纯度重组融合蛋白

,

为进一步鉴定其生物活性及

筛选小分子的研究奠定了基础

.

【总页数】

4

页

(P191-194)

【作

者】

李晓芳

;

宁保安

;

胡红芳

;

杨丽丽

;

左佳

;

王彩红

;

高志贤

【作者单位】

华中农业大学

,

食品科技学院

,

湖北

,

武汉

,430070;

军事医学科学院

,

卫生

学环境医学研究所

,

天津

,300050;

军事医学科学院

,

卫生学环境医学研究所

,

天

津

,300050;

华中农业大学

,

食品科技学院

,

湖北

,

武汉

,430070;

华中农业大学

,

食品科技

学院

,

湖北

,

武汉

,430070;

军事医学科学院

,

卫生学环境医学研究所

,

天津

,300050;

军事

医学科学院

,

卫生学环境医学研究所

,

天津

,300050