电泳是在外加电场中，带电粒子以一定的速度通过介质的过程，带电粒子通过速度受到自身所带电场力以及介质中阻力影响。电泳可以检测蛋白质是否存在以及结构是否变化。

我们今天使用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE法），介质为PAGE聚丙烯酰胺凝胶，SDS是十二烷基硫酸钠。

（1）在我们进行SDS-PAGE电泳时，在样品中要加入SDS。当样品加热之后，样品中的蛋白质的折叠形式被改变，主要是因为SDS能够破坏二硫键，使得折叠的状态打开成为一个松散的状态。在蛋白质打开之后，大量带负电的SDS 包裹在蛋白质的外层。当我们把样品加样到聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，由于分子外包裹了大量负电荷，因此分子原本表面所带的电荷就不会再影响分子的电泳迁移率，而只受到分子大小的影响。那么经过电泳之后不同分子量的分子就停留在不同的位置。

（2）实验原理的视频

（1）当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后，理论上可以通过所得条带的分子量来鉴定目的蛋白是否存在，但是这种鉴定受到很多因素的干扰，非常不准确。因此我们需要进一步使用Western blot （蛋白质印迹法）来鉴定血清中的IgG含量的多少。

（2）Western blot属于印迹法，是样品经过电泳分离后，转印至膜上，结合抗原-抗体反应对特定蛋白质进行检测的印迹技术

①第一步，需要把蛋白质从凝胶上转移到PVDF膜上，这一步称为转印。我们可以采用电转法，在电场压力下使蛋白质移动，经过转印，蛋白质可以比较牢固地吸附在PVDF膜上，便于后续的一系列洗涤的操作。

②第二步，含有一抗的溶液与PEDF膜进行孵育，此时一抗与蛋白样品中的抗原特异性结合。

③第三步：这时候一抗蛋白复合物仍然不能显色，接下来我们要借助二抗实现显像操作。二抗上通常携带了辣根过氧化物酶（HRP）的标记，而且它也可以识别并且结合一抗。当二抗与一抗蛋白质复合物结合后，加入含有HRP底物的显色液之后，二抗的HRP可以使底物生成有色产物用于检测。可以看出不能被一抗识别的蛋白质在这个过程中就无法显色。

(1)SDS-PAGE法的操作步骤示意图

（2）Western Blot法的操作步骤示意图

在SDS-PAGE实验过程结束后，我们可以通过考马斯亮蓝染色法去观察条带的位置，也可以不经过考马斯亮蓝染色直接进行转膜和Western Blot的操作。在加入显色液之后，大约10到30分钟之后，我们就可以观察到显现出来的条带。我们取出PVDF膜进行拍照，就可以得到实验结果。

从上述结果图中，我们可以观察到不同的试样中IgG条带的大小和颜色深浅。颜色越深条带越宽，代表试样中的IgG的含量越高。不过这样不能进行定量，为了得出定量的结果，我们可以对条带进行灰度的计算。灰度的计算，可以使用Image J或者Photoshop进行。