PI 3 Kinase p85 alpha (PIK3R1)靶点介绍及实验小贴士 |
您所在的位置：网站首页 › MAPK1蛋白大小 › PI 3 Kinase p85 alpha (PIK3R1)靶点介绍及实验小贴士 |
|
您可点击此处下载PI 3 Kinase p85 alpha (PIK3R1)靶点介绍及实验小贴士pdf文件。
图一：PI 3 Kinase p85 alpha靶点蛋白结构。图片来源：SWISS-MODEL。PI 3 Kinase p85 alpha靶点介绍蛋白功能蛋白定位异构体 & 翻译后修饰WB实验贴士注意事项阳性对照阴性对照结果示例关键控制点参考文献PI 3 Kinase p85 alpha靶点介绍蛋白功能 通过其SH2结构域与活化的（磷酸化的）Tyr蛋白激酶结合，也可作为一个衔接蛋白，介导p110催化结构域与质膜的结合。 在胰岛素敏感组织中，它对于胰岛素刺激增加葡萄糖摄取和糖原合成是必需的。 蛋白定位PI 3 Kinase p85 alpha定位于细胞质、内质网、高尔基体、细胞核等。 图二：PI 3 Kinase p85 alpha ICC实验结果图，Anti-PI 3 Kinase p85 alpha抗体 [EPR18702] (ab191606)。绿色：PI 3 Kinase p85 alpha，红色：Tubulin，蓝色：DAPI。异构体 & 翻译后修饰人（P27986） ：异构体 1、4： 80-85kDa （预测） 异构体 2、3、5：40-55 kDa （预测） 小鼠（P26450） ：83 kDa （预测） 大鼠（Q63787）：异构体 p85-alpha：83 kDa （预测） 异构体 p55-alpha、p50-alpha：49-53 kDa （预测） 在T细胞中可以被CBLB多聚泛素化修饰，这不会促进蛋白酶体降解，但在T细胞活化时破坏与CD28和CD3Z的关联。 存在磷酸化修饰；可被PTPRJ去磷酸化。 回到顶部 WB实验贴士注意事项PI 3激酶p85 alpha预测蛋白条带大小为83 kDa，存在多个异构体，蛋白水解片段可能存在于不同的组织和细胞中，WB检测时p85 alpha蛋白可能存在多条蛋白条带，建议不要裁膜。 阳性对照重组人PI 3 Kinase p85 alpha蛋白（ab84769） Hela细胞裂解液 阴性对照人PIK3R1敲除的Hela细胞系（ ab265116）/ 细胞裂解物（ ab257029） 结果示例图三：WB- Anti-PI 3 Kinase p85 alpha抗体 [EPR5513] (ab133595)。泳道1：20 µg Hela细胞裂解液泳道2：20 µg PIK3R1敲除的Hela细胞裂解液一抗：Anti-PI 3 Kinase p85 alpha抗体 [EPR5513] (ab133595)，浓度 1/1000稀释。 Anti-GAPDH 抗体 [6C5] (ab8245) ，浓度 1/20000 稀释。二抗：山羊抗兔IgG H&L （IRDye® 800CW）预吸附二抗（ab216773），山羊抗鼠IgG H&L （IRDye® 680RD）预吸附二抗（ab216776)，浓度 1/20000 稀释。结果描述：PI 3 Kinase p85 alpha（绿色），GAPDH（红色）。预测条带大小：83 kDa检测条带大小：90 kDa图四：WB- Anti-PI 3 Kinase p85 alpha抗体 [EPR18702] (ab191606)。泳道1：10 µg 小鼠大脑裂解液泳道2：10 µg小鼠心脏裂解液泳道3：10 µg小鼠肾脏裂解液泳道4：10 µg小鼠脾脏裂解液泳道5：10 µg大鼠大脑裂解液泳道6：10 µg大鼠心脏裂解液泳道7：10 µg大鼠肾脏裂解液泳道8：10 µg小鼠脾脏裂解液泳道9：10 µg C6（大鼠胶质瘤细胞）细胞裂解液泳道10：10 µg RAW 264.7（Abelson小鼠白血病病毒诱导的小鼠巨噬细胞）细胞裂解液泳道11：10 µg PC-12（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）细胞裂解液泳道12：10 µg NIH/3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）细胞裂解液一抗：Anti-PI 3 Kinase p85 alpha抗体 [EPR18702] (ab191606)，浓度 1/1000稀释。二抗： HRP标记的山羊抗兔二抗（ab97051），浓度 1/100000 稀释。预测条带大小：84 kDa检测条带大小：46 kDa、85 kDa关键控制点在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点： 样本制备 添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。 添加复合磷酸酶抑制剂，以防止蛋白在提取时被去磷酸化。 整个样本制备过程中，保持样本置于冰上。 通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。 电泳 至少上样20μg总蛋白进行电泳。 建议使用阳性对照。 转膜 建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。 回到顶部参考文献Nabil Miled, Ying Yan, Wai-Ching Hon, Olga Perisic, Marketa Zvelebil, Yuval Inbar, Dina Schneidman-Duhovny, Haim J Wolfson, Jonathan M Backer, Roger L Williams. Mechanism of two classes of cancer mutations in the phosphoinositide 3-kinase catalytic subunit. Science. 2007 Jul 13;317(5835):239-42. doi: 10.1126/science.1135394.Diana Mandelker, Sandra B Gabelli, Oleg Schmidt-Kittler, Jiuxiang Zhu, Ian Cheong, Chuan-Hsiang Huang, Kenneth W Kinzler, Bert Vogelstein, L Mario Amzel. A frequent kinase domain mutation that changes the interaction between PI3Kalpha and the membrane. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 Oct 6;106(40):16996-7001. doi: 10.1073/pnas.0908444106. Epub 2009 Sep 23.D A Fruman, L C Cantley, C L Carpenter. Structural organization and alternative splicing of the murine phosphoinositide 3-kinase p85 alpha gene. Genomics. 1996 Oct 1;37(1):113-21. doi: 10.1006/geno.1996.0527. |
| CopyRight 2018-2019 办公设备维修网 版权所有 豫ICP备15022753号-3 |