疫苗临床实验中为何必检IFN-γ

实际上，在临床试验和候选疫苗中，用ELISpot法监测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）是评价抗原特异性T细胞免疫的金标准，而IFN-γ作为免疫活性细胞分泌的细胞因子在诱导抗病毒免疫中起着重要的免疫调理作用，包括激活CTL、自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）细胞和吞噬细胞等，这是CD8+CTL激活的标志。

因此，建立IFN-γ的ELISpot检测方法，可以作为检测和疫苗引起细胞免疫效应评估的有效方法，目前也是“金标准”。

ELISpot法的应用及免疫评估示例

1、同一志愿者体内的PBMCs，通常接种后细胞分泌IFN-γ的有效斑点数是接种前2倍及以上即认为成功产生免疫效应。

图2

图2为一名受试者接种新冠疫苗后第30天采血用ELIspot法检测IFN-γ所读出的斑点图谱，f1-f3为阴性对照孔平行孔，f4-f6为多肽刺激孔平行孔，f10-f12为阳性刺激孔平行孔。

2、在疫苗免疫前后机体产生IFN-γ的水平间接反映了辅助性T细胞的活性和自身免疫性疾病如过敏、感染等。

图4

图4

图3和图4分别是同一受试者接种新冠疫苗前第0天和接种后第180天采血用ELIspot法检测IFN-γ所读出的斑点图谱，e1-e3、g1-g3为阴性对照孔平行孔，e4-e6、g4-g6为多肽刺激孔平行孔，e7-e9、g7-g9为阳性刺激孔平行孔，试验结果显示接种前阴性孔本底就很高且接种前后阴性孔斑点数均值大于多肽刺激孔均值，提示受试者本身患有自身免疫性疾病的可能如严重的类风湿性关节炎等疾病。

总结

自新冠疫情爆发以来，美莱德生物分析中心细胞免疫小组已为多家疫苗研发企业检测评估疫苗临床实验的安全性和有效性，并成功建立了ELISpot法检测人外周血单个核细胞（PBMCs）分泌IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6的方法学，同时我们建立了更多其他的细胞因子方法学来区分不同亚群激活的T细胞，如Th1型细胞产生的特征性因子TNF-α等和Th2型细胞产生细胞因子IL-5,IL-10等，以此研究和评估多种关键性T细胞及先天免疫细胞的免疫活动。

参考文献：

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