EMSA实验解析–凝胶电泳也能办大事，用电泳分析分子互作！（核酸

2024-07-09 09:54| 来源: 网络整理| 查看: 265

转自ZSCI：https://mp.weixin.qq.com/s/We_Cna_aiazBbt9ETNqUdQ

一、EMSA基本概念 EMSA：凝胶迁移实验，是一种检测蛋白质和核酸序列相互结合的技术；可用于核酸与蛋白相互作用的定性和定量分析。

EMSA研究对象：

二、EMSA实验原理

三、EMSA 流程实验设计

材料准备：荧光探针合成。目前常用的荧光标记有5(6)-FAM（羧基荧光素）、FITC（异硫氰酸荧光素）标记和 P32放射性同位素标记等。

材料准备：蛋白的纯化

材料准备：PAGE胶的配制

◆ 凝胶配制

◆ 加入凝胶

◆ 凝胶凝结

孵育电泳

◆ 添加体系

◆ 样品孵育

◆ 上样电泳

凝胶显影

四、EMSA 结果分析

五、EMSA 拓展

EMSA注意事项：

◆ 核酸探针避光存放

◆ 蛋白样品低温存放

◆ 蛋白样品加抑制剂

◆ 样品孵育充分混匀

◆ PAGE凝胶预电泳

◆ 上样前冲洗泳道孔

EMSA实验优点：

◆ 简单快捷：相较于CHIP和RIP，EMSA具有更简单的操作步骤，更短的实验周期，约一天内可完成。

◆ 结果可靠：EMSA实验能较真实的模拟蛋白质与核酸在体内互作的机制与过程。数据重复性好。

EMSA实验缺点：

◆ 通量低：EMSA一次实验仅能验证少数的核酸序列信息，通量低。CHIP和RIP实验通过目标蛋白分离以及高通量测序，可以得到海量的互作核酸序列信息。

◆ 结果局限：EMSA基于蛋白天然构象与核酸的某一段区域结合而发生相互作用。因此不能找到具体蛋白的何种氨基酸位点或区域，与核酸的片段相互作用。

【本文地址】

今日新闻