Klenow Fragment, Exo-，即没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I (E.coli. DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment, Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'和3'→5'外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment, Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3'末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-补平双链DNA 5'突出(5' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或T公司(Competitor)的Klenow Fragment, Exo-，37℃孵育10min进行反应，75℃孵育10min以终止反应。取出5μl，加入1μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，之后用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128)室温染色15min，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与T公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 5' overhang。dsDNA with 5' overhang (也称具有5'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序，把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平双链DNA 3'突出(3' overhang)末端的效果请参考图2。

图2.碧云天生产的Klenow Fragment, Exo-不会打平3'突出(3' overhang)末端的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或本公司的Klenow Fragment，37℃孵育10min进行反应，75℃孵育10min以终止反应。取出5μl，加入1μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，之后用NA-Red D0128 (EB升级换代产品，2000X)室温染色15min，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，与本公司的Klenow Fragment相比，本产品不具有打平3'突出末端的活性。反应体系(20μl)：50mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 5mM MgCl2, 1mM DTT, 50µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 3' overhang。dsDNA with 3' overhang (也称具有3'突出末端的双链DNA)是使用D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照该产品说明书推荐的程序，把 5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTCTATGTATCTATGTAT-3'这两条寡核苷酸进行退火反应得到的产物。

用途：5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的polA基因片段。

分子量：约68kDa(单体)。

活性定义：37℃ 30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：67mM potassium phosphate (pH7.4), 6.7mM MgCl2, 1mM 2-mercaptoethanol, 0.033mM dATP, 0.033mM dTTP, 0.4MBq/ml [3H]-dTTP, 62.5µg/ml poly(dA-dT)•poly(dA-dT).

纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

酶储存溶液：25mM Tris-HCl (pH7.5), 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) glycerol.

Reaction Buffer (10X)：500mM Tris-HCl (pH8.0 at 25℃), 50mM MgCl2, 10mM DTT.

缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y 、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。

失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment, Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment, Exo-有抑制作用。

-20℃保存。

酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。