编者按:

随着CAR-T细胞疗法的蓬勃发展，每月都会出现新的CAR-T理念和技术。小编尝试把其中一些编录于此，以鼓励我们的患者——抗癌路上，有无数的科学家、医务工作者和我们并肩作战，并且不断取得新的胜利。

增强CAR-T细胞的功能和安全性

T 细胞内在功能障碍和免疫抑制性肿瘤微环境是限制CAR-T免疫疗法临床疗效的关键因素。即使有效，显著的CAR-T细胞毒性也会限制其治疗潜力。这些缺点迫切需要一种策略来安全地为T细胞配备有效治疗所需的关键属性。

研究人员通过开发Uni-Vect平台来解决这一挑战：

首先，通过敲除内源性T细胞受体，使CAR信号成为诱导系统的唯一激活剂，这样做可以减少辅助分子表达失调介导的不良事件。尽管T细胞受体敲除会导致转导效率适度降低，但少量的敲除可以安全地介导癌症消退，有临床试验表明，癌症缓解可以在转导效率低至5%的情况下发生。

然后，研究人员采用了三种方法升级了CAR-T细胞的功能：

(1) 开发了iIL-12-CAR-T 细胞，用人类白介素12增强CAR-T细胞的抗肿瘤活性。iIL-12 CAR-T细胞能够瞬时分泌白介素12，防止白介素12总体水平过高，有助于降低毒性。

(2) 改善CRS 6受体a阻断抗体的能力，使CAR-T 细胞能够在扩增和分泌细胞因子之间达到适当的平衡，从而有效地清除肿瘤而不会产生致命毒性。

(3) 对T细胞的分化状态、功能和扩增进行编程。利用Uni-Vect平台，研究人员使iTF-CAR-T 细胞只是进行短暂的扩增，T细胞最终在肿瘤被清除后收缩，从而降低恶性转化或自身免疫的风险。

研究结果表明，Uni-Vect是一个广泛适用的平台，可用于即插即用方式升级T细胞，并能够制造定义明确的、具有均匀转基因分布的细胞产品。此外，还可用于筛选和表征抗原特异性免疫受体。

（图片摘要）

冷冻保存的CAR-T细胞与新鲜输注的一样有效

细胞治疗产品的低温保存允许储存细胞产品，以方便运输、为可能的后续输注准备产品……它还允许选择在最佳时间进行细胞收集，因此，低温保存对于细胞治疗产品非常重要。

但是，CAR-T细胞的冷冻保存也存在一系列问题，比如，由于细胞经历冻融循环而导致功效丧失或毒性增加。

为了更仔细地评估冷冻保存对CAR-T细胞疗法的影响，研究人员分析了包括40名接受统一剂量抗CD22 CAR-T细胞治疗的患者和19名接受统一剂量双特异性CD19/22 CAR-T细胞治疗的患者的临床结果和毒性细胞。

在CD22队列中，21名患者接受了冷冻保存的细胞，19名患者接受了新鲜输注。在双特异性CD19/22细胞队列中，11名患者接受了冷冻保存的细胞，8名患者接受了新鲜输注。

结果显示，新鲜输注或冷冻保存细胞之间没有显著差异，它们都具有相似的扩增、毒性特征和疾病反应、细胞凋亡率。更重要的是，在CD19/22队列中，输注冷冻保存产品后未达到客观缓解的两名患者中，一名在第二次输注时获得客观缓解，而第二次输注的是来自原始制造的冷冻保存产品。这证明冷冻保存的CAR-T细胞能够在体内扩增并有效靶向白血病。

（冷冻保存与新鲜CAR T细胞患者的疾病反应）

达沙替尼作为CAR-T细胞增强剂

达沙替尼是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，研究人员发现，它可以作为转导增强剂，在不影响 CD3阳性细胞选择性的情况下，将递送带有CD3-LV的CAR的基因递送率提高10倍。这是非常了不起的发现，因为常用的转导增强剂仅可实现2倍范围内的改善。

常见的转导增强剂通过独立促进细胞结合受体起作用，而达沙替尼通过其激酶抑制剂活性，阻止CD3-LV介导的T细胞活化而发挥其转导增强作用。由于作用方式的这些差异，达沙替尼还可以和其它可用的增强剂结合使用，协同提高基因传递率。

达沙替尼还具有可逆活性。从细胞中去除达沙替尼后，T淋巴细胞中的信号会迅速恢复，对生存力和增殖力都没有影响。因此，在存在达沙替尼的情况下，载体颗粒的结合得到增强，而在去除后，T细胞活化和转导得以正常进行。

因此，将达沙替尼与CD3-LV结合使用为当前使用VSV-LV的CAR-T细胞生成方法提供了一种可行的替代方法。这可能会大大改进LV基因传递策略。

（达沙替尼增强CD3靶向CAR基因转移，允许长期杀伤活性）

CAR-T细胞疗法清除术后残存癌细胞

早期癌症患者通过进行肿瘤切除手术，通常有希望达到临床治愈。然而，手术切除边缘残留肿瘤细胞的风险仍然很高，特别是在局部晚期肿瘤中，这导致癌症局部复发的风险增加。对于这些患者来说，在进行不完全手术切除后快速、安全地清除残留肿瘤细胞的治疗方案将是有益的。

Carl带领的研究团队近日发表论文，验证了CAR-T细胞治疗的局部、术中应用可能是一种有效的辅助治疗的假设。

研究人员首先优化了用于CAR-T细胞递送的纤维蛋白凝胶配方，使得其剂量刚好可以将CAR-T细胞保留在切除的肿瘤腔中，但又允许CAR-T细胞迁移出凝胶。体外和体内数据表明，使用5mg/ml纤维蛋白原溶液和3.0 U/ml凝血酶溶液的纤维蛋白凝胶中的CAR-T细胞显示出最强大的抗肿瘤效果。

结合两种异种移植模型的数据，研究人员发现，与相同剂量但没有纤维蛋白凝胶输送的CAR-细胞不同，在所有小鼠的不完全手术切除后，应用于切除腔内的纤维蛋白凝胶中的间皮素特异性CAR-T细胞清除了残余肿瘤细胞，这表明，纤维蛋白凝胶中CAR-T细胞的局部递送在手术后的较长时间内保持着抗肿瘤活性。在植入纤维蛋白凝胶的一些小鼠中，检测到外周血中T细胞的全身运输。临床上，在任何小鼠中均未观察到治疗后的伤口愈合并发症。

总之，CAR-T细胞可以有效且安全地用于不能完全切除的实体瘤的手术辅助治疗。这种方法还可以扩展到额外递送细胞因子、溶瘤病毒、检查点抗体或其他药物/生物制剂，以进一步提高总体抗肿瘤反应。

（纤维蛋白凝胶中的CAR-T细胞清除了小鼠模型中不完全手术后残留的肿瘤细胞。）

参考文献：

1、Smole A, Benton A, Poussin M A, et al. Expression of inducible factors reprograms CAR-T cells for enhanced function and safety[J]. Cancer Cell, 2022, 40(12): 1470-1487. e7.

2、Dreyzin A, Panch S R, Shalabi H, et al. Cryopreserved anti-CD22 and bispecific anti-CD19/22 CAR T cells are as effective as freshly infused cells[J]. Molecular Therapy-Methods & Clinical Development, 2023, 28: 51-61.

3、Braun A H, Frank A M, Ho N, et al. Dasatinib is a potent enhancer for CAR T cell generation by CD3-targeted lentiviral vectors[J]. Molecular Therapy-Methods & Clinical Development, 2023, 28: 90-98.

4、Uslu U, Da T, Assenmacher C A, et al. Chimeric antigen receptor T cells as adjuvant therapy for unresectable adenocarcinoma[J]. Science Advances, 2023, 9(2): eade2526.